2) 2-3 сутки теплового обогащения
3) 5-7 сутки холодового обогащения
4) 1-2 сутки теплового обогащения
Правильный срок первичного высева на плотные дифференциально-диагностические среды — 2–3-и сутки холодового обогащения. Патогенные иерсинии, прежде всего Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis, относятся к психротрофным микроорганизмам: они способны сохраняться и размножаться при низких температурах, тогда как значительная часть сопутствующей микрофлоры при таких условиях растёт значительно медленнее или угнетается.
Холодовое обогащение проводят обычно при температуре около 4–8 °C. За 2–3 суток повышается концентрация иерсиний в материале, что увеличивает вероятность их выделения при последующем посеве на среды Эндо, с бромтимоловым синим, МакКонки и другие разрешённые хромогенные или дифференциальные среды. Более ранний высев может дать ложноотрицательный результат из-за низкой численности возбудителя, а длительное ожидание не является необходимым и может снижать диагностическую эффективность.
Тепловое обогащение для первичного выделения иерсиний не является оптимальным: повышенная температура преимущественно стимулирует рост сопутствующей энтеробактериальной микрофлоры и не обеспечивает селективного преимущества возбудителю. На плотных средах подозрительные колонии оценивают по морфологии и ферментативным признакам, после чего подтверждают вид культуральными, биохимическими, серологическими или молекулярно-генетическими методами.
| Этап или признак | Характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Холодовое обогащение | Инкубация материала при низкой температуре, обычно 4–8 °C | Создаёт преимущество для психротрофных иерсиний и ограничивает рост части сопутствующей флоры |
| Срок первичного высева | 2–3-и сутки после начала холодового обогащения | Позволяет увеличить концентрацию возбудителя до уровня, достаточного для обнаружения на плотной среде |
| Тепловое обогащение | Использование повышенной температуры для стимулирования роста бактерий | Не является предпочтительным подходом при поиске иерсиний из-за усиления роста конкурирующей микрофлоры |
| Среда МакКонки | Дифференцирует энтеробактерии по ферментации лактозы и подавляет многие грамположительные микроорганизмы | Иерсинии обычно формируют лактозонегативные, бесцветные или слабо окрашенные колонии |
| Среда Эндо | Позволяет оценивать рост грамотрицательных бактерий и ферментацию лактозы | Колонии иерсиний чаще имеют светлую, бесцветную или слабокрашенную морфологию, что помогает отбирать подозрительные изоляты |
| Среда с бромтимоловым синим | Дифференциальная среда, выявляющая особенности ферментации углеводов по изменению окраски | Используется для первичной ориентировочной оценки колоний иерсиний в сочетании с их морфологией |
| Подтверждение культуры | Идентификация вида культуральными, биохимическими, серологическими или ПЦР-методами | Необходима для отличия патогенных иерсиний от других представителей семейства Enterobacterales |
Выбор холодового обогащения основан на экологической и физиологической особенности иерсиний — способности сохраняться и размножаться при низких температурах. Срок 2–3 суток представляет компромисс между накоплением возбудителя и сохранением диагностической ценности посева. Результат первичного роста на селективно-дифференциальной среде всегда рассматривают как предварительный и подтверждают исследованием чистой культуры. При интерпретации учитывают клинические данные, вид материала и возможность присутствия близкородственных энтеробактерий.