2) мочевиной и индикатором
3) глюкозой и индикатором
4) канаванином и глицином
Заменой среды Штайба служит синтетическая среда с L-дигидроксифенилаланином (L-ДОФА). У клинически значимых представителей рода Cryptococcus, прежде всего C. neoformans и C. gattii, имеется фенолоксидазная активность, связанная главным образом с ферментом лакказой. Лакказа окисляет L-ДОФА с образованием реакционноспособных хинонов, которые полимеризуются в меланин; поэтому колонии приобретают коричневую или почти чёрную окраску.
Среда Штайба содержит фенольные соединения семян, выполняющие аналогичную роль субстрата для меланогенеза, поэтому потемнение колоний на обеих средах рассматривается как положительная фенолоксидазная реакция. Большинство других медицински значимых дрожжей не образуют выраженного меланина в этих условиях и сохраняют кремовую или беловатую окраску. Однако признак не заменяет комплексную идентификацию: его оценивают вместе с микроскопией, выявлением капсулы, уреазной активностью и современными методами видовой идентификации.
| Метод или признак | Биологическая основа | Типичный результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Синтетическая среда с L-ДОФА | Окисление субстрата фенолоксидазой и синтез меланина | Потемнение колоний Cryptococcus | Специфичный ориентировочный признак криптококков среди большинства дрожжей |
| Среда Штайба | Окисление фенольных соединений экстракта птичьего корма | Коричнево-чёрная окраска колоний | Классический аналог фенолоксидазной пробы |
| Уреазная среда с индикатором | Гидролиз мочевины с образованием аммиака и защелачиванием среды | Изменение цвета индикатора | Cryptococcus обычно уреаза-положителен, но признак недостаточно специфичен и встречается у других дрожжей |
| Среда с глюкозой и индикатором | Ферментация или ассимиляция углевода с изменением pH | Изменение окраски среды | Не позволяет надёжно отличить криптококки от многих других дрожжевых грибов |
| Среда с канаванином, глицином и бромтимоловым синим (CGB) | Различия в устойчивости к канавану и использовании глицина | Характерное посинение обычно наблюдается у C. gattii | Применяется преимущественно для дифференциации C. gattii и C. neoformans, а не как общий заменитель среды Штайба |
| Микроскопия с выявлением капсулы | Капсула плохо окрашивается обычными красителями и выявляется негативным окрашиванием | Дрожжевые клетки с прозрачным капсульным ореолом | Поддерживает идентификацию криптококка, но требует сочетания с культуральными и биохимическими тестами |
Положительная реакция на L-ДОФА является проявлением меланогенеза и отражает наличие у криптококков активной лакказы. Наиболее выраженное потемнение обычно формируется при инкубации в течение нескольких суток, однако интенсивность реакции может зависеть от штамма и условий культивирования. Отрицательная реакция не исключает криптококк при недостаточном времени инкубации или дефектной экспрессии фермента. Окончательное заключение подтверждают комплексом признаков и, при необходимости, MALDI-TOF-масс-спектрометрией или молекулярным тестированием.