2) темнопольного микроскопа
3) автоматизированного анализатора
4) полуавтоматического шейкера
РИФ-абс относится к непрямым методам иммунофлуоресценции, поэтому обязательным условием её выполнения является наличие люминесцентного микроскопа. На предметном стекле фиксируют антиген Treponema pallidum; специфические антитела исследуемой сыворотки связываются с трепонемами, после чего к образовавшимся иммунным комплексам присоединяется меченный флуорохромом антиглобулиновый конъюгат. При возбуждении флуорохрома ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом связанные трепонемы приобретают характерное яркое свечение, которое оценивают микроскопически.
Предварительная абсорбция сыворотки трепонемным сорбентом удаляет значительную часть групповых, перекрёстно реагирующих антител к непатогенным трепонемам и повышает специфичность исследования. Таким образом, метод выявляет не сам возбудитель в клиническом материале, а антитела пациента, способные связываться с антигенами бледной трепонемы. Положительная реакция проявляется специфической флуоресценцией микроорганизмов на стекле, поэтому обычная световая или темнопольная оптика не обеспечивает необходимой регистрации сигнала.
Темнопольный микроскоп применяют при другом диагностическом подходе — прямом обнаружении живых подвижных трепонем в отделяемом шанкра или других свежих высыпаний. Автоматизированные анализаторы используются преимущественно для иммуноферментных и хемилюминесцентных трепонемных тестов, а шейкер может быть вспомогательным лабораторным устройством, но не является принципиально необходимым прибором для визуальной оценки РИФ-абс.
| Метод | Что выявляется | Принцип регистрации | Необходимое оборудование | Основное диагностическое значение |
|---|---|---|---|---|
| РИФ-абс (FTA-ABS) | Антитела к антигенам T. pallidum | Свечение флуорохромного антиглобулинового конъюгата | Люминесцентный микроскоп | Трепонемное подтверждающее исследование; не позволяет надёжно различить текущую и перенесённую инфекцию |
| Темнопольная микроскопия | Живые подвижные трепонемы | Рассеяние света микроорганизмами на тёмном фоне | Темнопольный микроскоп | Прямая диагностика раннего сифилиса по материалу из свежих поражений |
| РПР | Антитела к липоидным антигенам | Макроскопическая флоккуляция частиц | Ручное или полуавтоматическое оборудование для постановки реакции | Скрининг, определение титра и контроль эффективности лечения |
| VDRL | Антикардиолипиновые антитела | Микроскопическая флоккуляция | Световой микроскоп | Нетрепонемная диагностика; исследование ликвора при подозрении на нейросифилис |
| ИФА или хемилюминесцентный анализ | Трепонемные IgM, IgG либо суммарные антитела | Оптический или хемилюминесцентный сигнал | Автоматизированный иммунологический анализатор | Высокопроизводительный первичный скрининг, в том числе в обратном диагностическом алгоритме |
| РПГА/TPPA | Специфические трепонемные антитела | Агглютинация сенсибилизированных частиц | Планшет и стандартное лабораторное оснащение | Ручное подтверждающее трепонемное исследование, не требующее люминесцентной микроскопии |
РИФ-абс является качественным или полуколичественным трепонемным тестом, результаты которого должны сопоставляться с клиническими данными и показателями нетрепонемных реакций. Трепонемные антитела могут сохраняться длительно, иногда пожизненно, даже после полноценного лечения, поэтому выраженность флуоресценции не используют для оценки терапевтического ответа. Для динамического наблюдения предпочтительно определять титр одной и той же нетрепонемной реакции. В современных алгоритмах РИФ-абс во многих лабораториях заменена более стандартизованными методами, однако физический принцип её постановки неизменно требует люминесцентной визуализации.