2) человека
3) барана (+)
4) лошади
Гемолитическую активность Bacillus cereus, выделенного из пищевых продуктов, стандартно определяют на кровяном агаре с дефибринированной бараньей кровью, обычно в концентрации около 5%. Для B. cereus характерен выраженный β-гемолиз: вокруг колоний формируется прозрачная зона полного разрушения эритроцитов. Эритроциты барана выбраны не потому, что только они чувствительны к данному микроорганизму, а вследствие хорошей воспроизводимости реакции, стандартизованности питательных сред и чёткой визуализации зоны гемолиза.
Разрушение эритроцитарных мембран обусловлено действием гемолизинов и фосфолипаз B. cereus, включая холестеринзависимый цитолизин и фосфолипазные ферменты. Повреждение мембраны приводит к выходу гемоглобина и просветлению агара вокруг колонии. Гемолитическая активность является важным фенотипическим признаком при исследовании пищевых изолятов, однако не используется изолированно: окончательная идентификация требует оценки морфологии клеток и спор, подвижности, лецитиназной активности, биохимических свойств и, при необходимости, молекулярных маркеров.
Использование эритроцитов человека, кролика или лошади возможно в экспериментальных исследованиях, но такие варианты менее унифицированы и могут давать отличающуюся выраженность гемолиза. Наиболее важное дифференциально-диагностическое значение реакция имеет при сопоставлении с Bacillus anthracis, для которого типично отсутствие гемолиза на кровяном агаре. Поэтому правильным субстратом в данном тесте являются эритроциты барана.
| Показатель | Характеристика реакции | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Стандартный субстрат | Кровяной агар с дефибринированной бараньей кровью | Унифицированная постановка теста на гемолитическую активность |
| β-гемолиз | Полное просветление агара вокруг колонии | Типичный признак гемолитических штаммов B. cereus |
| α-гемолиз | Неполный гемолиз с зеленоватым или буроватым изменением среды | Нетипичен для выраженной гемолитической активности; требует подтверждения другими тестами |
| γ-гемолиз | Отсутствие видимой зоны разрушения эритроцитов | Не характерен для большинства штаммов B. cereus; при наличии других признаков заставляет исключать B. anthracis |
| Эритроциты человека, кролика или лошади | Возможна различная чувствительность к гемолизинам | Не являются предпочтительным стандартом для рутинной пищевой бактериологии из-за меньшей сопоставимости результатов |
| Дифференциация с B. anthracis | B. cereus обычно гемолитичен, B. anthracis обычно негемолитичен | Признак ориентировочный и должен подтверждаться комплексом культуральных, биохимических и молекулярных методов |
Выраженность гемолиза может зависеть от состава среды, длительности инкубации и конкретного штамма. Оценивать результат следует при наличии контрольных культур и с учётом морфологии колоний. Отсутствие гемолиза не позволяет автоматически исключить B. cereus, если остальные признаки соответствуют виду. При подозрении на особо опасный вид дальнейшая работа проводится по требованиям лабораторной биобезопасности.