2) почернение
3) позеленение (+)
4) покраснение
Правильный ответ — позеленение . Для Clostridium perfringens описан характерный культуральный признак: сероватые колонии, выросшие анаэробно на кровяном или кровяно-сахарном агаре, при последующем контакте с атмосферным кислородом приобретают зеленоватую окраску. Этот феномен используется как один из ориентировочных признаков при культуральной идентификации возбудителя.
Позеленение связано с изменениями компонентов крови в зоне роста и гемолиза. C. perfringens продуцирует несколько мембранотропных токсинов; особенно важен α-токсин — фосфолипаза C (лецитиназа), повреждающая фосфолипиды мембран эритроцитов, а перфринголизин O (исторически θ-токсин) обладает выраженной гемолитической активностью. На кровяном агаре это способствует формированию характерных зон гемолиза; при доступе кислорода происходят окислительные превращения гемоглобина и его производных, что визуально проявляется зеленоватым оттенком культуры и прилежащей среды.
Важно отличать этот признак от почернения, которое также характерно для лабораторного исследования C. perfringens, но возникает в других условиях. На сульфитсодержащих средах, в частности среде Вильсона–Блера, бактерия восстанавливает сульфит, что приводит к образованию темного осадка соединений железа и почернению колоний и среды. Следовательно, почернение является средозависимой биохимической реакцией, тогда как в данном случае диагностически значимым является именно позеленение ранее выросших колоний при их экспозиции на воздухе.
| Диагностический признак | Характеристика C. perfringens | Диагностическое значение / механизм |
|---|---|---|
| Рост на кровяном агаре | Сероватые колонии, часто с двойной зоной гемолиза | Гемолитическое действие α-токсина и перфринголизина O; важный ориентировочный культуральный признак |
| Контакт колоний с воздухом | Появление зеленоватой окраски | Окислительные изменения гемоглобина и его производных в зоне гемолиза |
| Среда Вильсона–Блера | Почернение колоний и окружающей среды | Восстановление сульфита с образованием темных соединений железа; не следует смешивать с позеленением на кровяной среде |
| Желточный агар | Зона опалесценции вокруг колоний | Лецитиназная активность α-токсина; лежит в основе реакции Наглера |
| Молочная среда | Бурное свертывание молока с разрывом сгустка газом | Так называемая stormy fermentation вследствие интенсивной ферментации углеводов и газообразования |
| Морфология и подвижность | Крупные грамположительные палочки; неподвижны | Неподвижность помогает дифференцировать C. perfringens от многих других клостридий |
| Условия культивирования | Преимущественно анаэробный рост, быстрое размножение и выраженное газообразование | Соответствует метаболизму анаэробной спорообразующей бактерии; вегетативные клетки относительно устойчивее к кратковременному воздействию кислорода, чем многие строгие анаэробы |
Культуральные признаки C. perfringens оценивают в совокупности, поскольку ни изменение цвета колоний, ни гемолиз сами по себе не являются достаточными для окончательной видовой идентификации. Особенно характерно сочетание быстрого анаэробного роста, интенсивного газообразования, двойной зоны гемолиза, лецитиназной активности и отсутствия подвижности. При клинической диагностике эти фенотипические признаки дополняют современными методами идентификации, включая MALDI-TOF масс-спектрометрию и молекулярные тесты при соответствующих показаниях. Позеленение после контакта с воздухом следует запоминать именно как классический культуральный маркер на кровесодержащих плотных средах.