2) определение чувствительности к антибиотикам
3) идентификацию чистой культуры
4) накопление чистой культуры (+)
На втором этапе бактериологического исследования материала на Yersinia enterocolitica проводят накопление чистой культуры. После первичного посева и выявления подозрительных колоний их пересевают на питательные или дифференциально-диагностические среды, чтобы получить достаточную биомассу и убедиться в отсутствии посторонней микрофлоры. На этом этапе оценивают однородность роста, морфологию колоний и соответствие культуральных признаков предполагаемой иерсинии.
Накопленная чистая культура необходима для последующей видовой идентификации: микроскопии, определения основных биохимических свойств и подтверждения принадлежности к Y. enterocolitica. Для выделения возбудителя используют селективные среды, в том числе агар CIN, на котором иерсинии формируют характерные мелкие колонии с выраженной зоной помутнения по типу бычьего глаза . Идентификация чистой культуры относится к следующему этапу, а определение чувствительности к антибиотикам и фаготипирование выполняют после подтверждения вида и при наличии соответствующих клинико-эпидемиологических показаний.
Принцип этапности позволяет отделить выделение подозрительного микроорганизма от его окончательной идентификации. Перенос материала с изолированной колонии в накопительную среду снижает риск ошибочной интерпретации смешанного роста и обеспечивает получение культуры, пригодной для дальнейших исследований. Поэтому правильным является именно накопление чистой культуры.
| Этап исследования | Основная процедура | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Первичный посев | Посев исследуемого материала на селективные, дифференциально-диагностические и, при необходимости, обогатительные среды | Выделение подозрительных колоний на фоне сопутствующей микрофлоры |
| Накопление чистой культуры | Пересев подозрительной колонии и получение однородного роста | Формирование достаточной биомассы для последующей идентификации; основной процесс второго этапа |
| Оценка культуральных признаков | Изучение размера, формы, цвета, прозрачности и характера роста колоний | Предварительное распознавание колоний, типичных для Yersinia |
| Микроскопия | Окраска по Граму и оценка морфологии клеток | Обнаружение грамотрицательных коккобацилл; результат требует подтверждения культуральными и биохимическими тестами |
| Видовая идентификация | Определение биохимических свойств и подтверждение принадлежности к Y. enterocolitica | Окончательное установление вида изолированного микроорганизма |
| Определение чувствительности к антибиотикам | Постановка диско-диффузионного или иного стандартизованного метода | Выбор антимикробной терапии; проводится на идентифицированной чистой культуре |
| Фаготипирование | Определение чувствительности штамма к диагностическим фагам | Дополнительная эпидемиологическая характеристика штамма, а не этап первичного выделения |
При работе с материалом, содержащим смешанную кишечную микрофлору, особенно важны селективность среды и контроль чистоты пересева. Полученная культура должна быть сохранена для подтверждающих тестов и, при необходимости, для определения антибиотикочувствительности. Результат исследования оценивают в совокупности с клиническими проявлениями и эпидемиологическими данными. Обнаружение Y. enterocolitica в чистой культуре повышает диагностическую значимость выделения возбудителя.