2) наличием капсулы
3) строением цитоплазматической мембраны
4) особенностями строения их клеточной стенки (+)
Различия в окраске по Граму определяются прежде всего особенностями строения клеточной стенки. У грамположительных бактерий она содержит многослойный, относительно толстый пептидогликановый слой с тейхоевыми и липотейхоевыми кислотами. У грамотрицательных микроорганизмов пептидогликан тонкий и расположен в периплазматическом пространстве между цитоплазматической мембраной и наружной мембраной, содержащей липополисахарид.
В процессе окраски кристаллический фиолетовый образует с раствором Люголя крупный комплекс. У грамположительных бактерий он удерживается плотной пептидогликановой структурой после обработки спиртом или спирто-ацетоновой смесью, поэтому клетки остаются фиолетовыми. У грамотрицательных бактерий растворитель нарушает целостность наружной мембраны и облегчает вымывание комплекса через тонкий пептидогликан; после докрашивания сафранином или фуксином клетки приобретают розово-красный цвет.
Капсула и жгутики могут влиять на контрастность препарата, но не определяют принадлежность бактерии к грамположительным или грамотрицательным. Цитоплазматическая мембрана также не является основным критерием дифференциации, поскольку имеется у бактерий обеих групп. На результат могут влиять возраст культуры, повреждение клеточной стенки, чрезмерное обесцвечивание или недостаточная фиксация, поэтому окраску оценивают с учетом морфологии и культуральных свойств возбудителя.
| Признак | Грамположительные бактерии | Грамотрицательные бактерии |
|---|---|---|
| Основной структурный фактор | Толстый многослойный пептидогликан | Тонкий слой пептидогликана |
| Тейхоевые кислоты | Обычно присутствуют; участвуют в поддержании структуры стенки и адгезии | Как правило, отсутствуют |
| Наружная мембрана | Отсутствует | Присутствует; содержит липополисахарид и порины |
| Удерживание комплекса кристаллический фиолетовый — йод | Сохраняется после обесцвечивания спиртом | Не сохраняется из-за разрушения наружной мембраны и тонкой стенки |
| Цвет после окраски по Граму | Фиолетовый или сине-фиолетовый | Розовый или красный |
| Типичные представители | Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, Clostridium | Escherichia, Klebsiella, Neisseria, Pseudomonas |
| Медицинское значение клеточной стенки | Часто определяет чувствительность к β-лактамам и гликопептидам, хотя устойчивость зависит от конкретных механизмов | Наружная мембрана ограничивает проникновение ряда препаратов и содержит эндотоксин |
Окраска по Граму является первичным дифференциально-диагностическим методом, позволяющим быстро оценить морфологию и предполагаемую группу возбудителя. Она используется при исследовании клинического материала, контроле чистоты культуры и выборе направления дальнейшей идентификации. Бактерии без типичной пептидогликановой стенки, например микоплазмы, этим методом полноценно не выявляются. Для окончательной диагностики результат сопоставляют с данными посева, биохимических тестов, масс-спектрометрии или молекулярных методов.