2) эквилибрированную культуральную, в которой эмбрионы культивировались, или эквилибрированную специальную среду для переноса эмбрионов без покрытия маслом (+)
3) специальную для переноса эмбрионов, покрытую маслом
4) на основе HEPES-буфера без покрытия маслом
Подготовленные к переносу эмбрионы помещают в предварительно эквилибрированную культуральную среду, использованную для культивирования, либо в валидированную специальную среду для эмбриотрансфера без масляного покрытия. Эквилибрирование обеспечивает восстановление заданных значений pH, осмолярности и температуры после контакта среды с газовой фазой инкубатора. Это необходимо для сохранения метаболического равновесия эмбриона и предотвращения повреждений, связанных с резким изменением условий при загрузке в катетер.
Среда для переноса обычно содержит белковый компонент, например альбумин, а в отдельных протоколах — гиалуронат, повышающий вязкость и способствующий удержанию эмбриона в зоне переноса. Масляный слой применяется главным образом при культивировании в микрокаплях: он уменьшает испарение и колебания осмолярности, но не должен входить в рабочий объем, загружаемый в катетер. Попадание масла в катетер ухудшает визуальный контроль, может привести к неполному выведению эмбриона и создает риск нежелательного контакта эмбриона с масляной фазой.
HEPES-буферированные растворы поддерживают pH вне инкубатора без контролируемой концентрации CO2 и предназначены преимущественно для кратковременных манипуляций, отмывания и осмотра эмбрионов. Они не являются универсальной заменой среде для переноса, поскольку состав и длительность контакта должны соответствовать стадии развития эмбриона и инструкции производителя. Ключевой принцип — минимизация времени вне инкубатора при использовании небольшого объема эквилибрированной среды, совместимой с системой эмбриотрансфера.
| Компонент или тип среды | Основное назначение | Значение для переноса эмбриона |
|---|---|---|
| Эквилибрированная культуральная среда | Поддержание развития эмбриона в контролируемых условиях инкубатора | Может использоваться для переноса при наличии соответствующей валидации и соблюдении протокола |
| Специальная среда для эмбриотрансфера | Кратковременное поддержание эмбриона во время загрузки и введения в полость матки | Оптимизирована по pH, осмолярности, вязкости и содержанию белка; применяется после эквилибрирования |
| Гиалуронатсодержащая среда | Повышение вязкости и стабилизация микросреды вокруг эмбриона | Может использоваться по показаниям и согласно лабораторному протоколу, но не заменяет требования к эквилибрированию |
| HEPES-буферированная среда | Кратковременные манипуляции вне инкубатора при отсутствии стабильной CO2-атмосферы | Не является стандартной универсальной средой для переноса; длительный контакт должен быть ограничен |
| Минеральное масло | Снижение испарения и колебаний pH и осмолярности культуральных капель | Не добавляется в объем, загружаемый в катетер для переноса |
| Неэквилибрированная среда | Среда, не приведенная к рабочим значениям температуры, pH и газового равновесия | Не должна использоваться для переноса из-за риска осмотического и кислотно-щелочного стресса |
Перед загрузкой эмбриона оценивают соответствие среды стадии развития, проверяют температуру и исключают образование пузырьков воздуха. Время пребывания эмбриона вне инкубатора должно быть минимальным, а все манипуляции выполняются в условиях, предотвращающих охлаждение и изменение pH. После переноса катетер осматривают для подтверждения отсутствия эмбриона и при необходимости выполняют контроль промывных фракций.