2) фронтальным способом (+)
3) хроматографически
4) спектрально
Абсолютная электрофоретическая подвижность характеризует скорость перемещения заряженной частицы в электрическом поле, отнесённую к напряжённости этого поля: μ = v/E. Она отражает собственные электрокинетические свойства исследуемых частиц и зависит от их заряда, размера и формы, а также от вязкости, pH, ионной силы и температуры среды.
Фронтальный способ основан на формировании и регистрации границы — фронта — между зоной исследуемых частиц и буферным раствором. Измеряют расстояние, пройденное фронтом за определённое время, рассчитывают его скорость и с учётом напряжённости электрического поля получают абсолютную подвижность. Направление смещения фронта позволяет также установить знак заряда: катионы движутся к катоду, а анионы — к аноду.
При зональном электрофорезе пробу наносят в виде узкой зоны, после чего оценивают положение и разделение отдельных полос. Этот подход преимущественно используется для качественной идентификации и определения относительной подвижности компонентов по отношению к стандарту или фронту растворителя. Поэтому для прямого определения абсолютной электрофоретической подвижности применяют именно фронтальный метод.
| Критерий | Фронтальный способ | Зональный способ |
|---|---|---|
| Форма исследуемой системы | Формируется движущаяся граница между исследуемым веществом и электролитом | Исходная проба наносится компактной зоной |
| Основной измеряемый параметр | Скорость перемещения фронта в электрическом поле | Расстояние миграции и положение разделившихся зон |
| Определяемая характеристика | Абсолютная электрофоретическая подвижность μ = v/E | Преимущественно относительная подвижность и состав смеси |
| Расчёт | Используются путь фронта, время миграции и напряжённость поля | Чаще рассчитывают отношение миграции компонента к миграции стандарта или маркерной зоны |
| Основное применение | Количественная характеристика электрокинетических свойств частиц | Разделение, идентификация и сравнительная оценка компонентов |
| Оценка знака заряда | Определяется по направлению движения фронта относительно электродов | Возможна по направлению миграции зоны, но метод обычно ориентирован на сравнительное разделение |
| Влияющие факторы | Заряд и размер частиц, вязкость, pH, ионная сила и температура буфера | Те же факторы, дополнительно — диффузия и уширение зон |
| Необходимость коррекции | В капиллярных системах учитывают электроосмотический поток и проводят калибровку | Для качественного анализа коррекция часто не требуется, если сравнение проводится в одинаковых условиях |
Абсолютная подвижность является физико-химическим параметром, а не только характеристикой положения полосы на электрофореграмме. Сопоставимость результатов возможна лишь при стандартизации состава буфера, pH, температуры и напряжённости поля. При капиллярном электрофорезе необходимо разграничивать истинную электрофоретическую подвижность и наблюдаемую скорость, включающую электроосмотический поток. Фронтальный метод поэтому имеет принципиальное значение для прямого расчёта данного параметра.