2) красное (+)
3) сине-зеленое
4) фиолетовое
В реакции Легаля натрия нитропруссид взаимодействует с исследуемым веществом в щелочной среде, вследствие чего возникает характерное красное или вишнёво-красное окрашивание. В фармакогностическом анализе эта проба применяется преимущественно для обнаружения карденолидов — сердечных гликозидов, содержащих α,β-ненасыщенное пятичленное γ-лактонное кольцо. Красная окраска рассматривается как положительный аналитический эффект реакции.
Химическая основа пробы связана с активацией метиленовой группы лактонного кольца в щелочной среде и последующим образованием окрашенного продукта с нитропруссид-ионом. Интенсивность оттенка зависит от концентрации вещества, состава растворителя, количества щёлочи и времени наблюдения; окраска обычно постепенно ослабевает, поскольку образующийся хромофор нестабилен. Поэтому результат оценивают непосредственно после добавления реактивов и подтверждают другими реакциями на структурные фрагменты сердечных гликозидов.
| Реакция | Основные реактивы | Выявляемый структурный фрагмент | Положительный аналитический эффект | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|---|
| Легаля | Натрия нитропруссид, щёлочь; возможно применение пиридина | α,β-ненасыщенное пятичленное лактонное кольцо карденолидов | Красное или вишнёво-красное окрашивание | Качественное подтверждение карденолидной структуры; окраска может быстро исчезать |
| Бальета | Пикриновая кислота в щелочной среде | Ненасыщенное лактонное кольцо | Оранжевое или оранжево-красное окрашивание | Дополнительная проба на сердечные гликозиды карденолидного типа |
| Раймонда | м-Динитробензол и щёлочь | Активная метиленовая группа лактонного кольца | Фиолетовое окрашивание | Позволяет отличить реакцию Легаля по цвету применяемого аналитического эффекта |
| Кедде | 3,5-Динитробензойная кислота и щёлочь | α,β-ненасыщенное лактонное кольцо | Красно-фиолетовое или фиолетовое окрашивание | Чувствительная реакция для выявления карденолидов |
| Келлера — Килиани | Ледяная уксусная кислота, железа(III) хлорид, концентрированная серная кислота | 2-Дезоксисахара гликозидной части | Бурое кольцо на границе слоёв, синее или сине-зелёное окрашивание верхнего слоя | Подтверждает углеводный компонент молекулы, а не лактонное кольцо |
| Либермана — Бурхарда | Уксусный ангидрид и концентрированная серная кислота | Стероидное ядро агликона | Зелёное или сине-зелёное окрашивание | Используется для подтверждения стероидной структуры |
Реакция Легаля относится к групповым качественным пробам и сама по себе не обеспечивает полной идентификации лекарственного вещества. Надёжное заключение получают при сочетании реакций на лактонное кольцо, стероидное ядро и дезоксисахара с хроматографическими или спектральными методами. Оранжевый, фиолетовый и сине-зелёный цвета характерны для других реактивов и структурных фрагментов. Следовательно, в условиях пробы Легаля диагностически значимым результатом является именно красное окрашивание.