2) спектрофотометрический метод
3) гравиметрический метод
4) поляриметрию
Для количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственном растительном сырье применяют титриметрический метод, преимущественно в варианте окислительно-восстановительного титрования. Аскорбиновая кислота является сильным восстановителем: она окисляется до дегидроаскорбиновой кислоты, одновременно восстанавливая используемый титрант. В зависимости от нормативной методики используют раствор йода или 2,6-дихлорфенолиндофенола; момент эквивалентности фиксируют по появлению устойчивой окраски индикаторной системы.
Перед анализом сырье экстрагируют в кислой среде, что способствует переходу аскорбиновой кислоты в раствор и снижает скорость её окисления кислородом воздуха. Титриметрия позволяет непосредственно связать объём израсходованного титранта с количеством вещества по стехиометрии реакции, поэтому метод удобен для фармакопейного контроля и не требует сложного оборудования. Кислая среда и быстрое проведение анализа имеют принципиальное значение, поскольку аскорбиновая кислота легко разрушается под влиянием света, кислорода, повышенной температуры и ионов металлов.
Спектрофотометрия может применяться как альтернативный инструментальный метод, однако оптическое поглощение экстракта способно зависеть от сопутствующих пигментов и других компонентов растительного сырья. Гравиметрический метод для этого соединения непригоден из-за отсутствия удобного, селективного и устойчивого осадка. Поляриметрия также не обеспечивает необходимой специфичности: на величину вращения плоскости поляризации будут влиять другие оптически активные вещества экстракта.
| Метод | Аналитический принцип | Пригодность для определения аскорбиновой кислоты |
|---|---|---|
| Окислительно-восстановительное титрование | Расчёт содержания по объёму титранта, вступившего в реакцию с восстановителем | Основной фармакопейный подход; простота, воспроизводимость и связь результата со стехиометрией реакции |
| Йодометрический вариант | Аскорбиновая кислота восстанавливает йод до иодида, сама окисляясь до дегидроаскорбиновой кислоты | Применим при контролируемой кислотности и защите раствора от окисления; конец титрования выявляют с крахмалом |
| Титрование 2,6-дихлорфенолиндофенолом | Восстановление окрашенного окисленного реагента аскорбиновой кислотой | Удобно для анализа экстрактов; конечную точку определяют по появлению устойчивой слабой окраски избытка реагента |
| Спектрофотометрия | Измерение оптической плотности раствора или окрашенного продукта реакции | Возможна, но требует калибровки и учёта спектральных помех со стороны компонентов растительного сырья |
| Гравиметрия | Выделение и взвешивание осадка или продукта превращения | Не используется рутинно: отсутствует удобное селективное превращение аскорбиновой кислоты в стабильный осадок |
| Поляриметрия | Измерение угла вращения плоскости поляризации | Низкая специфичность для многокомпонентного растительного экстракта; метод не является предпочтительным |
Таким образом, выбор титриметрии основан на выраженных восстановительных свойствах аскорбиновой кислоты и возможности количественно измерить эквивалентный расход реагента. Достоверность результата повышают экстракция в кислой среде, минимизация контакта с воздухом и быстрое выполнение анализа. При расчёте содержания учитывают массу навески, объём экстракта, концентрацию титранта и поправочный коэффициент его стандартизации.