2) празиквантел
3) анестезин
4) ритуксимаб (+)
Вестерн-блот — это иммунологический метод выявления белков после их разделения электрофорезом в полиакриламидном геле, переноса на мембрану и обработки специфическими антителами. Ритуксимаб представляет собой химерное моноклональное антитело класса IgG1κ, направленное против CD20 на поверхности B-лимфоцитов, поэтому его можно обнаруживать по иммунореактивности и характерной молекулярной массе. В восстановительных условиях для молекулы выявляются тяжелая цепь приблизительно 50 кДа и легкая цепь около 25 кДа; в невосстановительных условиях анализируют интактный иммуноглобулин с массой около 150 кДа.
После электрофоретического разделения белка ритуксимаба мембрану инкубируют с первичными антителами, распознающими человеческий IgG или специфический идиотип препарата, а затем с мечеными вторичными антителами. Сигнал регистрируют хемилюминесцентным или хромогенным способом. Для достоверной идентификации именно ритуксимаба предпочтительны антитела к его уникальному вариабельному участку либо подтверждение связывания с CD20, поскольку неспецифические анти-IgG-антитела могут выявлять и другие терапевтические иммуноглобулины.
| Объект | Молекулярная природа | Применимость вестерн-блота | Рациональный метод идентификации |
|---|---|---|---|
| Ритуксимаб | Химерное моноклональное антитело IgG1κ, белковый препарат | Подходит; выявление антителами, оценка цепей и иммунореактивности | Вестерн-блот, ELISA, иммунохимический анализ, масс-спектрометрия |
| Периндоприл | Низкомолекулярное синтетическое лекарственное вещество, ингибитор АПФ | Не является стандартным объектом: не обладает белковой структурой и эпитопами | ВЭЖХ, ИК-спектроскопия, масс-спектрометрия, титриметрические реакции |
| Празиквантел | Низкомолекулярное антигельминтное средство, производное пиразиноизохинолина | Не подходит для иммуноблоттинга как основной метод идентификации | ВЭЖХ, УФ- и ИК-спектроскопия, хроматографические методы |
| Анестезин | Бензокаин, сложный эфир пара-аминобензойной кислоты | Не подходит: это органическое низкомолекулярное соединение, а не белок | ИК-спектроскопия, тонкослойная хроматография, ВЭЖХ, химические реакции |
| Восстановительный электрофорез | Разрушает дисульфидные связи белка и разделяет полипептидные цепи | Позволяет оценить тяжелые и легкие цепи ритуксимаба | SDS-PAGE с последующим переносом на мембрану |
| Иммунологическое выявление | Распознавание антигенных детерминант специфическими антителами | Формирует качественный сигнал, подтверждающий наличие белкового препарата | Первичные анти-ритуксимабные или анти-IgG-антитела и меченые вторичные антитела |
Таким образом, правильный выбор обусловлен белковой природой ритуксимаба и наличием у него специфических антигенных детерминант. Для малых органических молекул иммуноблоттинг не является типичным способом фармацевтической идентификации, поскольку они не разделяются и не распознаются как белковые антигены. В практическом контроле качества результаты вестерн-блота целесообразно подтверждать методами, оценивающими структуру и молекулярную массу препарата.