2) образования гидроксамата железа (+)
3) образования серебряного зеркала
4) образования азокрасителя
Дифференциация тестостерона пропионата и метилтестостерона основана на различии в строении функциональной группы при C17. В тестостероне пропионате 17β-гидроксильная группа этерифицирована пропионовой кислотой, поэтому препарат содержит сложноэфирную связь. При взаимодействии с гидроксиламином эта связь расщепляется с образованием гидроксамовой кислоты, которая с ионами Fe3+ образует окрашенный комплекс — гидроксамат железа. Появление характерного окрашивания служит положительной реакцией на сложноэфирную группу.
Мethylтестостерон, напротив, содержит свободную 17β-гидроксильную группу и дополнительную метильную группу в положении 17α; сложноэфирного фрагмента в его молекуле нет. Поэтому образование гидроксамата железа для него нехарактерно, что позволяет отличить его от тестостерона пропионата. Реакции с нингидрином, серебряным зеркалом и образованием азокрасителя предназначены соответственно для выявления аминогрупп, альдегидов и определённых фенольных или ароматических аминных структур, отсутствующих либо недостаточно реакционноспособных в данных стероидах.
| Критерий | Тестостерона пропионат | Метилтестостерон |
|---|---|---|
| Функциональная группа при C17 | 17β-пропионат, сложноэфирная группа | Свободная 17β-гидроксильная группа |
| Дополнительный заместитель | Пропионильный остаток | Метильная группа в положении 17α |
| Реакция с гидроксиламином | Протекает с образованием гидроксамовой кислоты | Не даёт специфического образования гидроксамовой кислоты |
| Проба с ионами Fe3+ | Положительная: образуется окрашенный гидроксамат железа | Отрицательная или нехарактерная |
| Аналитический признак | Наличие сложноэфирной связи в молекуле | Отсутствие сложноэфирной связи |
| Практическое значение | Позволяет подтвердить именно эфирную форму тестостерона | Позволяет отличить свободный 17β-спирт от его пропионатного эфира |
Таким образом, правильным является испытание на образование гидроксамата железа. Его положительный результат связан не с общим стероидным ядром, а с наличием пропионатного эфира в структуре тестостерона пропионата. Метилтестостерон отличается химически устойчивой свободной гидроксильной группой и 17α-метильным заместителем, поэтому данной диагностической реакции не даёт. В фармацевтическом анализе такая проба используется как функционально-групповой тест и при необходимости дополняется методами хроматографии.