2) отношения площадей основных пиков у анализируемого и стандартного растворов
3) показателя преломления анализируемого раствора (+)
4) угла вращения анализируемого раствора
Рефрактометрический метод основан на измерении показателя преломления раствора — безразмерной величины, характеризующей изменение направления распространения света при переходе из одной среды в другую. Для конкретной фармацевтической субстанции и растворителя показатель преломления закономерно зависит от концентрации, поэтому содержание вещества устанавливают по градуировочной зависимости n = f(C) или по фармакопейным таблицам. При расчёте учитывают температуру, длину волны света и состав растворителя, поскольку эти факторы непосредственно влияют на результат.
Следовательно, концентрацию определяют по величине показателя преломления анализируемого раствора. Оптическая плотность является аналитическим сигналом спектрофотометрии, отношение площадей пиков — количественным критерием в хроматографии, а угол вращения плоскости поляризации используется в поляриметрии. Рефрактометрия особенно удобна для быстрого анализа прозрачных растворов, однако её специфичность ограничена: присутствие других растворённых компонентов также может изменять показатель преломления.
| Метод | Измеряемый параметр | Основной принцип количественной оценки | Ключевые условия и ограничения |
|---|---|---|---|
| Рефрактометрия | Показатель преломления n | Сопоставление измеренного значения с градуировкой или нормативными таблицами | Необходим контроль температуры; предпочтительны прозрачные растворы известного состава |
| Спектрофотометрия | Оптическая плотность A | Расчёт по закону Бугера—Ламберта—Бера или калибровочному графику | Требуются подходящая длина волны и отсутствие спектральных интерференций |
| Высокоэффективная жидкостная хроматография | Площадь или высота хроматографического пика | Сравнение сигнала анализируемого вещества со стандартом или внутренним стандартом | Метод селективен, но требует разделения компонентов и исправной аппаратуры |
| Поляриметрия | Угол вращения плоскости поляризации | Расчёт содержания оптически активного вещества по удельному вращению | Применима преимущественно к хиральным или оптически активным соединениям |
| Потенциометрическое титрование | Изменение потенциала электрода | Определение точки эквивалентности по кривой титрования | Подходит для кислотно-основных и окислительно-восстановительных реакций |
| Гравиметрия | Масса выделенного или осаждённого продукта | Пересчёт массы соединения в содержание исходной субстанции | Высокая точность возможна при полном осаждении и чистоте осадка; метод трудоёмок |
Для повышения воспроизводимости измерение проводят после термостатирования прибора и образца. Перед анализом рефрактометр калибруют по стандартной жидкости или очищенной воде в соответствии с инструкцией к прибору. Если раствор содержит несколько веществ с близкими или неизвестными рефрактометрическими свойствами, одного показателя преломления недостаточно для селективной идентификации и количественного определения.