2) в режиме поддержания постоянства тока
3) электрофоретическое в полимере (+)
4) соединений при использовании поверхностно-активных веществ
Принцип капиллярного гель-электрофореза заключается в электрофоретической миграции заряженных частиц через полимерную матрицу, заполняющую капилляр. В качестве разделяющей среды используют сшитый гель или растворимый линейный полимер, например производные акриламида или целлюлозы. Полимерная сеть выполняет функцию молекулярного сита: она по-разному задерживает компоненты в зависимости от их размера, формы и заряда. Поэтому более мелкие молекулы, как правило, перемещаются быстрее, а крупные сильнее взаимодействуют с полимерной структурой и мигрируют медленнее.
Разделение происходит под действием электрического поля, то есть имеет именно электрофоретическую природу. Постоянство тока относится к режиму работы источника высокого напряжения, но не определяет сущность метода. Использование хиральных селекторов характерно для хирального капиллярного электрофореза, а поверхностно-активных веществ — для мицеллярной электрокинетической хроматографии. Следовательно, верный ответ отражает основной механизм капиллярного гель-электрофореза — разделение веществ при их электрофоретическом движении в полимерной среде.
| Метод | Разделяющая среда | Основной критерий разделения | Типичные объекты анализа |
|---|---|---|---|
| Капиллярный гель-электрофорез | Сшитый гель или растворимый полимер | Размер, форма и электрофоретическая подвижность; эффект молекулярного сита | Белки, пептиды, олигонуклеотиды, фрагменты ДНК, высокомолекулярные примеси |
| Капиллярный зональный электрофорез | Свободный буферный раствор без полимерной сетки | Соотношение заряда и гидродинамического размера частиц | Неорганические ионы, лекарственные вещества, метаболиты |
| Мицеллярная электрокинетическая хроматография | Буфер с мицеллами поверхностно-активного вещества | Распределение аналита между водной фазой и мицеллами | Нейтральные и заряженные низкомолекулярные соединения |
| Хиральный капиллярный электрофорез | Буфер или полимер с хиральным селектором | Различие во взаимодействии энантиомеров с хиральной фазой | Энантиомеры лекарственных веществ и их метаболитов |
| Капиллярное изоэлектрическое фокусирование | Амфолиты и формируемый градиент pH | Фокусирование белка в зоне, соответствующей его изоэлектрической точке | Белки, изоформы, биофармацевтические препараты |
| Изотахофорез | Лидирующий и терминальный электролиты | Формирование зон по электрофоретической подвижности | Ионы и концентрируемые заряженные аналиты |
| Режим постоянного тока | Определённые параметры электропитания | Стабилизация условий анализа, а не самостоятельный механизм разделения | Может применяться в различных вариантах капиллярного электрофореза |
На электрофореграмме результат оценивают по времени миграции, площади и форме пиков, а также по разрешению близко расположенных компонентов. Эффективность метода зависит от концентрации и типа полимера, размера его пор, вязкости среды, pH буфера, температуры и напряжённости электрического поля. В фармацевтическом анализе это позволяет контролировать белковые и пептидные примеси, варианты молекул, олигомеры и продукты деградации. Для идентификации соединений применяют сопоставление времени миграции со стандартом, а для количественного определения — калибровку по площади или высоте аналитического пика.