2) величине Rf
3) времени удерживания (+)
4) скачку потенциала индикаторного электрода
Подлинность лекарственного вещества при газожидкостной хроматографии устанавливают по времени удерживания — интервалу от момента введения пробы до появления максимума соответствующего хроматографического пика. Полученное значение сравнивают с временем удерживания стандартного образца или референтного вещества, анализируемого в тех же условиях. Совпадение времени удерживания в пределах установленного допуска подтверждает, что компонент исследуемой пробы имеет те же хроматографические свойства, что и эталон.
Разделение основано на распределении компонентов между подвижной газовой фазой и неподвижной жидкой фазой, нанесённой на внутреннюю поверхность капиллярной или насадки колонки. Время выхода вещества зависит от его летучести, полярности и сродства к неподвижной фазе, а также от температуры колонки, скорости газа-носителя и характеристик самой колонки. Поэтому время удерживания является не абсолютной константой вещества, а идентификационным критерием, воспроизводимым при стандартизованных условиях анализа.
Другие указанные параметры относятся к иным методам. Величина Rf характеризует перемещение вещества в тонкослойной хроматографии, отношение длины пробега вещества к длине пробега растворителя фактически является способом выражения этого показателя, а скачок потенциала индикаторного электрода используется в потенциометрических методах анализа. В газожидкостной хроматографии идентификацию дополнительно повышают сопоставлением относительного времени удерживания, спектральными данными или масс-спектрометрией.
| Метод или критерий | Измеряемый показатель | Принцип идентификации | Типичный объект применения |
|---|---|---|---|
| Газожидкостная хроматография | Время удерживания (tR) | Сопоставление положения пика исследуемого вещества с пиком стандартного образца при одинаковых условиях | Летучие и термостабильные лекарственные вещества, растворители, примеси |
| Газожидкостная хроматография | Относительное время удерживания | Отношение времени удерживания определяемого компонента к времени удерживания внутреннего стандарта или референтного вещества | Повышение воспроизводимости идентификации и количественного анализа |
| Тонкослойная хроматография | Величина Rf | Отношение расстояния, пройденного зоной вещества, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя | Идентификация растительного сырья, алкалоидов, флавоноидов и других нелетучих соединений |
| Потенциометрия | Изменение или скачок потенциала электрода | Регистрация изменения электродвижущей силы при изменении активности определяемых ионов | Кислотно-основное, осадительное и комплексонометрическое титрование |
| Спектрофотометрия | Максимум поглощения и спектр | Сравнение положения и интенсивности полос поглощения с данными стандартного образца | Идентификация и количественное определение веществ, поглощающих электромагнитное излучение |
| Масс-спектрометрия | Масса-заряд (m/z) и фрагментационный спектр | Сопоставление молекулярного и фрагментационного ионного состава с эталонными данными | Подтверждение структуры и идентификация сложных или близкородственных соединений |
Надёжность вывода по времени удерживания обеспечивают пригодность хроматографической системы, стабильность температуры и скорости газа-носителя, а также использование аттестованного стандартного образца. Один лишь факт появления пика не подтверждает подлинность, поскольку разные соединения могут иметь близкие времена удерживания. При анализе сложных лекарственных форм необходимо учитывать наличие вспомогательных веществ и возможное перекрывание пиков. Поэтому в ответственных случаях хроматографическое совпадение дополняют оценкой спектра или масс-спектра.