2) только неподвижной фазы
3) адсорбента
4) подвижной и неподвижной фаз (+)
Хроматографическое разделение основано на неодинаковом распределении компонентов смеси между подвижной и неподвижной фазами. Подвижная фаза перемещается через систему и переносит вещества, а неподвижная фаза удерживает их с различной силой. Благодаря различиям в коэффициентах распределения, адсорбции, ионному взаимодействию, размеру молекул или сродству к лиганду компоненты проходят систему с разной скоростью и разделяются.
Наличие обеих фаз является обязательным признаком хроматографического процесса. При отсутствии подвижной фазы не происходит переноса анализируемых веществ, а при отсутствии неподвижной фазы отсутствует дифференциальное удерживание и все компоненты перемещаются практически совместно. Адсорбент необходим только для адсорбционной хроматографии; в других вариантах неподвижная фаза может представлять собой жидкость, ионообменник, пористый гель или иммобилизованный биологический лиганд.
| Вид хроматографии | Неподвижная фаза | Подвижная фаза | Основной механизм разделения |
|---|---|---|---|
| Адсорбционная | Твёрдый адсорбент: силикагель, оксид алюминия | Жидкость или газ | Различная адсорбция компонентов на поверхности сорбента |
| Распределительная | Жидкая фаза, иммобилизованная на носителе, либо связанная фаза | Жидкость или газ | Неодинаковое распределение веществ между двумя несмешивающимися фазами |
| Ионообменная | Ионообменная смола или другой заряженный сорбент | Раствор электролита | Обратимый обмен ионов анализируемого вещества с противоионами сорбента |
| Эксклюзионная | Пористый гель | Буферный раствор или органический растворитель | Разделение по размеру и гидродинамическому объёму молекул |
| Аффинная | Носитель с иммобилизованным специфическим лигандом | Буферный раствор | Избирательное связывание вещества с лигандом и последующая элюция |
| Газовая | Капиллярная или насадочная колонка с неподвижной фазой | Инертный газ-носитель | Различия в летучести и взаимодействии компонентов с неподвижной фазой |
В фармацевтическом анализе сочетание фаз определяет селективность, время удерживания и эффективность разделения. Чем сильнее взаимодействие вещества с неподвижной фазой, тем больше его время удерживания при неизменных условиях элюирования. Количественную оценку разделения проводят по хроматографическим параметрам, включая время удерживания, фактор удерживания, разрешение и число теоретических тарелок. Поэтому наличие адсорбента не является универсальным критерием хроматографии, тогда как сочетание подвижной и неподвижной фаз является её фундаментальным условием.