2) щелочеустойчивости
3) термостабильности
4) спиртоустойчивости
Окраска по Цилю–Нильсену основана на кислотоустойчивости микобактерий, то есть на их способности сохранять основной краситель после обработки деколоризующим раствором, содержащим кислоту и спирт. Это свойство обусловлено особенностями клеточной стенки микобактерий: она богата липидами, прежде всего миколовыми кислотами, которые формируют плотный гидрофобный барьер и препятствуют вымыванию красителя.
В классической методике препарат окрашивают карболовым фуксином с прогреванием, что облегчает проникновение красителя через липидный слой. После обесцвечивания кислотно-спиртовым раствором кислотоустойчивые бактерии сохраняют красный цвет, а фон и некислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются контрастным красителем, например метиленовым синим. Поэтому микобактерии выявляются при микроскопии как тонкие красные палочки на синем фоне.
Обнаружение кислотоустойчивых бактерий в мазке является важным признаком бактериовыделения, однако само по себе не позволяет окончательно идентифицировать именно Mycobacterium tuberculosis. Кислотоустойчивость могут проявлять и нетуберкулезные микобактерии, а частично — некоторые представители рода Nocardia. Для видовой идентификации и подтверждения лекарственной устойчивости применяют молекулярно-генетические тесты и культуральное исследование.
| Признак | Характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Клеточная стенка | Содержит миколовые кислоты и другие липиды, формирующие воскообразный гидрофобный слой | Обеспечивает устойчивость к обесцвечиванию кислотно-спиртовой смесью |
| Основной краситель | Карболовый фуксин; прогревание повышает проникновение красителя в клеточную стенку | Кислотоустойчивые бактерии приобретают интенсивную красную окраску |
| Обесцвечивание | Используют кислотный или кислотно-спиртовой раствор | Микобактерии сохраняют краситель, большинство других бактерий его теряет |
| Контрастная окраска | Применяют метиленовый синий или другой контрастный краситель | Создаёт фон, на котором хорошо видны красные кислотоустойчивые палочки |
| Микроскопическая картина | Тонкие красные палочки, иногда расположенные группами или в виде скоплений | Поддерживает наличие кислотоустойчивых бактерий в исследуемом материале |
| Положительный мазок | Свидетельствует о присутствии кислотоустойчивых микроорганизмов и вероятном бактериовыделении | Требует клинико-рентгенологической оценки и подтверждения методом амплификации нуклеиновых кислот или посева |
Кислотоустойчивость является фенотипическим свойством, используемым для первичного обнаружения микобактерий в клиническом материале. Отрицательный результат микроскопии не исключает туберкулёз, поскольку чувствительность метода зависит от количества бактерий, качества образца и соблюдения техники окраски. Флуорохромная окраска аурамином повышает чувствительность скрининга, но также требует последующей идентификации возбудителя. Окончательная верификация туберкулёзной инфекции основывается на совокупности клинических данных и результатах молекулярного или культурального исследования.