2) гибридизационного метода на биочипах
3) микроскопии
4) культурального метода исследования (+)
Разрешающая способность порядка 10–100 жизнеспособных микробных клеток в 1 мл диагностического материала является классической характеристикой культурального метода. После предварительной обработки и, при необходимости, концентрирования образца материал засевают на плотные или жидкие питательные среды. Даже небольшое исходное количество микобактерий комплекса Mycobacterium tuberculosis размножается до уровня, при котором рост определяется визуально по колониям либо автоматически по изменению метаболических показателей среды.
Принципиальное преимущество культурального исследования состоит в выявлении именно жизнеспособных микобактерий, а не только их нуклеиновой кислоты. Метод является референсным для подтверждения бактериологического диагноза и последующего определения лекарственной чувствительности, однако требует значительно больше времени, чем молекулярные тесты. Микроскопия уступает ему по чувствительности, поскольку для обнаружения кислотоустойчивых микобактерий непосредственно в мазке обычно необходима существенно большая бактериальная нагрузка.
| Метод или характеристика | Ориентировочная чувствительность и выявляемый объект | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Культуральный метод, особенно жидкостные системы | Около 10–100 жизнеспособных микробных клеток/мл; регистрируется размножение микобактерий | Подтверждает наличие жизнеспособного возбудителя и позволяет выполнить фенотипическое тестирование лекарственной чувствительности |
| Культура на плотных средах | Чувствительность того же порядка, но результат формируется медленнее и зависит от скорости образования колоний | Дает возможность визуально оценить рост, выделить культуру и провести дальнейшую идентификацию |
| Микроскопия мазка | Обычно требуется около 5×103–104 микобактерий/мл; выявляются кислотоустойчивые бактерии | Быстрый способ ориентировочной оценки бактериовыделения, но без надежной видовой идентификации и с более низкой чувствительностью |
| ПЦР в режиме реального времени | Порог зависит от набора, типа материала и эффективности выделения ДНК; выявляется генетический материал микобактерий | Обеспечивает быстрый результат, но обнаружение ДНК не всегда означает наличие живых микроорганизмов |
| Гибридизация на биочипах | Чувствительность определяется системой амплификации, матрицей и набором зондов; регистрируется комплементарное связывание нуклеиновых кислот | Позволяет параллельно идентифицировать возбудителя и отдельные генетические маркеры лекарственной устойчивости |
| Отрицательный результат культурального исследования | Не исключает туберкулез при малом количестве возбудителя, некачественном образце, нарушении транспортировки или предшествующей терапии | Требует сопоставления с клинико-рентгенологическими данными и результатами других методов |
Показатель 10–100 клеток/мл отражает порог обнаружения возбудителя после его биологического размножения в питательной среде. Срок получения результата зависит от вида среды, скорости роста культуры и применяемой автоматизированной системы. При подозрении на туберкулез исследуют несколько образцов диагностического материала, поскольку единичный отрицательный посев не исключает малобациллярную инфекцию. Выделение культуры создает основу для видовой идентификации и выбора рациональной противотуберкулезной терапии.