2) эозиновый тест
3) MAR-тест
4) гипоосматический тест
Акросомную реакцию регистрируют с помощью флюоресцентно меченных лектинов, избирательно связывающихся с углеводными компонентами акросомных мембран. Наиболее часто применяют лектин Pisum sativum agglutinin (PSA), а также другие лектины, например peanut agglutinin (PNA). При акросомной реакции происходит слияние плазматической и наружной акросомной мембран, экзоцитоз содержимого акросомы и изменение доступности гликоконъюгатов; это сопровождается характерной перестройкой или исчезновением флуоресцентного сигнала в области головки сперматозоида.
Метод позволяет определить долю сперматозоидов с интактной акросомой и долю клеток, подвергшихся спонтанной либо индуцированной акросомной реакции. Оценка обычно проводится до и после воздействия физиологического индуктора, например кальциевого ионофора; диагностически значимым является изменение процента клеток с паттерном окрашивания, соответствующим реакции. Это функциональный тест, характеризующий способность сперматозоида пройти один из ключевых этапов оплодотворения и взаимодействовать с блестящей оболочкой ооцита.
Остальные перечисленные методы оценивают другие свойства сперматозоидов. Эозиновый тест отражает жизнеспособность и целостность плазматической мембраны, MAR-тест выявляет антиспермальные антитела, фиксированные на поверхности сперматозоидов, а гипоосмотический тест показывает функциональную сохранность клеточной мембраны по наличию набухания и завитка хвоста. Ни один из них непосредственно не демонстрирует структурно-функциональные изменения акросомы.
| Метод | Что оценивает | Основной диагностический признак | Связь с акросомной реакцией |
|---|---|---|---|
| Флюоресцентные лектины | Состояние акросомы и доступность её гликоконъюгатов | Изменение характера свечения головки сперматозоида до и после индукции реакции | Прямой функциональный метод регистрации акросомной реакции |
| Эозиновый тест | Жизнеспособность сперматозоидов | Проникновение эозина в клетки с повреждённой мембраной; мёртвые клетки окрашиваются | Не оценивает экзоцитоз акросомы |
| MAR-тест | Антиспермальные антитела на поверхности сперматозоидов | Связывание частиц с антителами и их локализация на сперматозоидах | Может косвенно влиять на оплодотворение, но не регистрирует саму реакцию |
| Гипоосмотический тест | Функциональную целостность плазматической мембраны | Набухание клетки и завиткообразное изменение хвоста в гипоосмотической среде | Не характеризует состояние акросомного аппарата |
| Индуцированная акросомная реакция | Резерв функциональной готовности сперматозоидов | Увеличение доли клеток с паттерном флуоресценции, соответствующим реакции, после стимуляции | Используется для оценки способности сперматозоидов к оплодотворению |
Акросомная реакция физиологически необходима для прохождения сперматозоидом оболочек ооцита и последующего слияния гамет. Недостаточная или преждевременная реакция может быть связана с нарушением мужской фертильности даже при сохранной подвижности и концентрации сперматозоидов. Результаты лектинового теста интерпретируют с учётом используемого лектина, способа индукции и референсных значений конкретной лаборатории. Наиболее информативна оценка одновременно с показателями подвижности, жизнеспособности и морфологии сперматозоидов.