2) CISS
3) CGH
4) HR-CGH
Правильный ответ — Rx-FISH. Этот метод является вариантом обратной флуоресцентной гибридизации in situ, при которой используется набор зондов, маркирующих различные участки одной хромосомы или ее полосы. Разные участки формируют воспроизводимый цветовой профиль, поэтому изменение последовательности сигналов позволяет установить не только присутствие хромосомного материала, но и его расположение. По этой причине Rx-FISH применим для выявления инверсий, внутрихромосомных инсерций, делеций, дупликаций и сложных перестроек.
Метод mBAND основан на аналогичном принципе многоцветного окрашивания отдельных хромосомных сегментов: нормальный хромосомный профиль сравнивают с профилем исследуемой хромосомы. При нарушении порядка цветных полос можно определить границы перестройки и приблизительно локализовать точки разрыва, включая случаи, которые не видны при стандартном кариотипировании. CISS преимущественно обеспечивает сплошное окрашивание всей хромосомы и помогает определить происхождение материала, но плохо дифференцирует изменения внутри одной хромосомы. CGH и HR-CGH оценивают главным образом изменения числа копий ДНК, поэтому не выявляют надежно сбалансированные инверсии и другие перестройки без потери или приобретения генетического материала.
| Метод | Основной принцип | Наиболее информативные изменения | Возможность анализа внутрихромосомных перестроек |
|---|---|---|---|
| mBAND | Многоцветная маркировка последовательных участков одной хромосомы | Инверсии, делеции, дупликации, сложные перестройки | Высокая; метод используется как эталонный подход для анализа структуры хромосомы |
| Rx-FISH | Обратная FISH с набором дифференциально меченных хромосомно- или сегмент-специфичных зондов | Изменение порядка и положения отдельных сегментов, происхождение фрагментов и маркерных хромосом | Высокая; по функциональным возможностям является аналогом mBAND |
| CISS | Подавление гибридизации повторяющихся последовательностей с формированием цельнохромосомного окрашивания | Идентификация материала конкретной хромосомы, межхромосомные обмены | Ограниченная; внутри одной хромосомы отдельные участки обычно не различаются |
| Обычная CGH | Сравнение интенсивности гибридизации ДНК пациента и контрольного генома | Хромосомные приобретения и потери, анеуплоидии | Низкая; сбалансированные перестройки обычно не обнаруживаются |
| HR-CGH | CGH с повышенной плотностью зондов и более высоким разрешением | Микроделеции, микродупликации и другие изменения числа копий небольшого размера | Не показывает пространственный порядок сегментов и не заменяет структурный FISH-анализ |
| Локус-специфическая FISH | Гибридизация зондов к конкретному гену или участку хромосомы | Точечные делеции, амплификации и известные транслокации | Эффективна при заранее предполагаемой перестройке, но не предназначена для полного картирования хромосомы |
Rx-FISH особенно полезен при подозрении на структурную аномалию, когда стандартное окрашивание не позволяет определить порядок хромосомных сегментов. Его диагностическая ценность выше при исследовании метафазных хромосом, поскольку именно в них можно оценить пространственное расположение флуоресцентных сигналов. Для скрининга геномных дисбалансов рациональнее применять CGH или HR-CGH, а для подтверждения конкретной внутрихромосомной перестройки — Rx-FISH или mBAND. Интерпретация результата должна сопоставляться с данными кариотипирования, клиническим фенотипом и, при необходимости, молекулярно-генетическим исследованием точек разрыва.