2) методом mFISH на хроматине интерфазных ядер
3) FISH с центромероспецифичным ДНК-зондом на хромосому 15
4) FISH с локус-специфичными ДНК-зондами на область микроделеций при синдромах Прадера-Вилли и Энгельмана
Малая сверхчисленная маркерная хромосома (sSMC) представляет собой дополнительный хромосомный материал, который при стандартном кариотипировании часто невозможно точно идентифицировать. Многоцветная FISH на метафазных пластинках (M-FISH, или многоцветное хромосомное окрашивание) одновременно использует набор хромосомоспецифичных зондов: каждая хромосома приобретает характерный цветовой профиль, поэтому материал маркера можно отнести к хромосоме 15 и оценить его связь с дупликацией 15q11-q13. При характерной морфологии это позволяет распознать inv dup(15), а строение маркера при необходимости уточняется дополнительными FISH-зондами или молекулярно-цитогенетическими методами.
Ключевым условием является исследование метафазных хромосом, поскольку именно на них видны отдельная маркерная хромосома, её размер, форма и расположение окрашенных участков. Исследование интерфазного хроматина не позволяет надёжно оценить целостную структуру маркера и его ориентацию. Центромероспецифичный зонд к хромосоме 15 подтверждает наличие центромерного материала 15-й хромосомы, но не доказывает инвертированную дупликацию; локус-специфичные зонды области синдромов Прадера—Вилли и Ангельмана выявляют изменения дозы критического региона, однако предназначены прежде всего для диагностики микроделеций и не определяют архитектуру всей sSMC.
| Метод | Что выявляет | Диагностическое значение и ограничения |
|---|---|---|
| Многоцветная FISH на метафазных пластинках | Хромосомное происхождение и состав дополнительного маркера | Основной метод из представленных для идентификации sSMC, производной от хромосомы 15; позволяет сопоставить маркер с inv dup(15) |
| Многоцветная FISH на интерфазных ядрах | Наличие отдельных последовательностей в ядре | Не даёт достоверной информации о форме, размере, ориентации и целостной структуре маркерной хромосомы |
| Центромероспецифичный зонд к хромосоме 15 | Присутствие альфа-сателлитной ДНК центромеры 15 | Подтверждает происхождение центромерного участка, но не показывает протяжённость дупликации и инвертированное расположение сегментов |
| Локус-специфичные зонды 15q11-q13 | Количество копий участков, связанных с синдромами Прадера—Вилли и Ангельмана | Могут выявить дополнительный сигнал при дупликации, но не заменяют анализ структуры sSMC и не диагностируют микроделецию при наличии избыточного материала |
| Хромосомный микроматричный анализ | Геномный дисбаланс и размер дуплицированного участка | Высокоразрешающе определяет прирост 15q, но обычно не устанавливает физическую организацию материала в маркерной хромосоме |
| FISH с несколькими локусными и центромерными зондами на метафазах | Расположение участков 15p и 15q, возможную дицентричность и границы маркера | Используется для подтверждения структуры inv dup(15) после установления хромосомного происхождения маркера |
| Анализ метилирования 15q11-q13 | Импринтинговый статус и родительское происхождение экспрессируемых участков | Помогает оценить функциональные последствия дополнительного материала, но не заменяет цитогенетическую идентификацию маркера |
Инвертированная дупликация 15 часто включает критический регион 15q11-q13, поэтому клинические проявления могут включать задержку психомоторного развития, эпилепсию, гипотонию и расстройства аутистического спектра. Выраженность фенотипа зависит от размера маркера, степени мозаицизма, числа функционально активных копий и родительского происхождения дополнительного материала. После цитогенетической идентификации обычно требуется уточнение копийности методом микроматричного анализа и оценка импринтинга или метилирования.