2) иммуноферментный анализ
3) реакцию иммунофлуоресценции
4) реакцию гемагглютинации
Полимеразная цепная реакция, применяемая при коронавирусной инфекции в формате ОТ-ПЦР или real-time RT-PCR, выявляет РНК вируса SARS-CoV-2 в клиническом материале. Поскольку геном коронавируса представлен РНК, перед амплификацией выполняется обратная транскрипция — синтез комплементарной ДНК, после чего специфические праймеры и флуоресцентный зонд обеспечивают многократное копирование и регистрацию выбранного участка генома. Именно сочетание молекулярной мишени и специфических праймеров определяет высокую аналитическую специфичность метода.
Для исследования обычно используют мазок из носоглотки или ротоглотки, а при тяжелом течении заболевания — материал из нижних дыхательных путей. Обнаружение РНК коронавируса методом ОТ-ПЦР служит лабораторным подтверждением инфекции, особенно в первые дни заболевания, когда антительный ответ еще не сформирован. Отрицательный результат не исключает инфекцию при неправильном заборе материала, слишком раннем или позднем исследовании, поэтому его оценивают с учетом клинических данных, сроков болезни и качества образца.
Иммуноферментный анализ и реакция иммунофлуоресценции могут применяться для обнаружения антигена либо специфических антител, однако серологические тесты преимущественно отражают иммунный ответ и имеют ограниченную информативность в начале заболевания. Реакция гемагглютинации не относится к основным современным методам подтверждения SARS-CoV-2-инфекции. Поэтому для прямой специфической диагностики активной коронавирусной инфекции ключевым методом является выявление вирусной нуклеиновой кислоты с помощью ОТ-ПЦР.
| Метод | Что выявляет | Основное диагностическое значение | Ограничения |
|---|---|---|---|
| ОТ-ПЦР | РНК SARS-CoV-2 после обратной транскрипции | Прямое подтверждение наличия вирусного генетического материала; основной метод диагностики активной инфекции | Результат зависит от сроков болезни, качества забора и транспортировки материала |
| ИФА на антиген | Белковые антигены вируса | Быстрое прямое выявление возбудителя, возможно применение в скрининге | Обычно уступает ОТ-ПЦР по чувствительности, особенно при низкой вирусной нагрузке |
| ИФА на антитела | Специфические IgM, IgG или суммарные антитела | Оценка сформированного иммунного ответа и факта перенесенной инфекции | Может быть отрицательным в первые дни; антитела не являются прямым доказательством наличия жизнеспособного вируса |
| Реакция иммунофлуоресценции | Антиген или антитела с использованием флуоресцентно меченых реагентов | Вспомогательное специфическое исследование при наличии валидированной тест-системы | Зависит от качества образца и субъективности интерпретации свечения |
| Реакция гемагглютинации | Способность вирусных частиц или антител изменять агглютинацию эритроцитов | Для SARS-CoV-2 не является стандартным методом подтверждения инфекции | Ограниченная применимость и недостаточная диагностическая специфичность |
ОТ-ПЦР обнаруживает сам возбудитель или его генетический материал, а не последствия контакта с ним. Положительный результат следует интерпретировать совместно с клинической картиной и эпидемиологическим анамнезом. Серологические методы имеют преимущественное значение для оценки иммунного ответа и ретроспективной диагностики.