2) низкая разрешающая возможность в диагностике робертсоновских транслокаций
3) невозможность детекции внутрихромосомных перестроек (+)
4) невозможность диагностики сбалансированных транслокаций
Мультицветная флуоресцентная гибридизация in situ (mFISH) основана на использовании наборов ДНК-зондов, каждый из которых окрашивает определённую хромосому индивидуальным спектральным цветом. Метод особенно эффективен для выявления межхромосомных перестроек: на производной хромосоме становится виден фрагмент, окрашенный цветом другой хромосомы. Поэтому mFISH позволяет диагностировать многие сбалансированные и несбалансированные транслокации, а также уточнять происхождение маркерных хромосом и сложных кариотипов.
При внутрихромосомной перестройке, например инверсии, внутривхромосомной транслокации или некоторых вставках, перемещение генетического материала происходит в пределах одной и той же хромосомы. Все её участки при mFISH имеют один цвет, поэтому изменение порядка сегментов не сопровождается появлением нового цветового сигнала и может остаться нераспознанным. Именно отсутствие надёжной детекции внутрихромосомных перестроек является принципиальным ограничением метода и обосновывает правильность отмеченного ответа.
Неспособность выявлять любые несбалансированные или сбалансированные транслокации для mFISH нехарактерна: крупные изменения обычно определяются по изменению цветового состава производных хромосом. При робертсоновских транслокациях метод также может показать участие акроцентрических хромосом, однако имеет ограниченную разрешающую способность для оценки центромерной области и коротких плеч. Для поиска точек разрыва применяют высокоразрешающее кариотипирование, локус-специфическую FISH, оптическое картирование или секвенирование генома.
| Тип изменения | Возможности mFISH | Диагностический принцип и ограничения |
|---|---|---|
| Нормальный кариотип | Все хромосомы имеют ожидаемый индивидуальный цвет | Оценивается наличие лишних, отсутствующих или атипично окрашенных хромосомных фрагментов |
| Сбалансированная межхромосомная транслокация | Обычно выявляется | На производных хромосомах обнаруживается обмен цветами без обязательной потери или приобретения материала |
| Несбалансированная транслокация | Обычно выявляется при достаточном размере сегмента | Определяются дупликация или делеция участков по изменению цветового паттерна; мелкие фрагменты могут быть пропущены |
| Робертсоновская транслокация | Может быть диагностирована | Хорошо определяется участие акроцентрических хромосом, но центромерные области и короткие плечи оцениваются с низким разрешением |
| Инверсия | Надёжно не выявляется | Весь материал принадлежит одной хромосоме и сохраняет один цвет; изменение порядка сегментов не видно |
| Внутрихромосомная транслокация или вставка | Может остаться нераспознанной | Отсутствует межхромосомный обмен цветом; требуются другие цитогенетические или молекулярные методы |
| Микроделеции и микродупликации | Ограниченно выявляются | Размер изменения может быть меньше разрешающей способности метода; предпочтительны хромосомный микроматричный анализ или таргетная FISH |
mFISH следует рассматривать как метод анализа крупных и сложных хромосомных перестроек, прежде всего межхромосомных. Отрицательный результат не исключает инверсию или другую сбалансированную перестройку внутри одной хромосомы. Выбор дополнительного исследования зависит от предполагаемого типа нарушения: для крупных структурных изменений применяют кариотипирование, для конкретного локуса — FISH, а для субмикроскопических изменений числа копий — хромосомный микроматричный анализ. При подозрении на сложные или криптические перестройки информативны оптическое картирование и секвенирование генома.