2) межвидовой in situ гибридизации (Rx-FISH)
3) многоцветного окрашивания хромосом (mFISH) (+)
4) комбинаторного бинарного мечения (COBRA)
Спектральное кариотипирование (SKY, spectral karyotyping) относится к методам многоцветной флуоресцентной in situ гибридизации и по диагностическому принципу наиболее близко к многоцветному окрашиванию хромосом — mFISH. В обоих методах применяют наборы хромосомоспецифичных painting -зондов, меченных различными комбинациями флуорохромов. Благодаря комбинаторному мечению каждой из 24 хромосом человека присваивается уникальная цветовая сигнатура, что позволяет одновременно идентифицировать весь хромосомный набор в одной метафазной пластинке.
Основное различие SKY и mFISH заключается не в цели исследования, а в способе регистрации флуоресценции. При SKY анализируется полный спектр излучения каждого участка изображения с последующей компьютерной спектральной классификацией и присвоением псевдоцвета; при классическом mFISH сигналы отдельных флуорохромов регистрируются последовательно через соответствующие оптические фильтры. Поэтому оба подхода особенно эффективны для выявления межхромосомных транслокаций, сложных перестроек и установления происхождения маркерных хромосом, в том числе в онкогенетике.
В отличие от SKY/mFISH, методы mBAND предназначены преимущественно для многоцветного сегментирования отдельных хромосом и более детального анализа внутрихромосомных перестроек. Rx-FISH основана на использовании межвидовой перекрёстной гибридизации, а COBRA представляет отдельную схему комбинаторного мечения, расширяющую возможности мультицветной FISH. Эти различия определяют диагностическую специализацию каждого подхода.
| Метод | Основной принцип | Основная диагностическая задача |
|---|---|---|
| SKY | Комбинаторное мечение целых хромосом с анализом спектра флуоресценции | Одновременная идентификация всех хромосом, выявление сложных межхромосомных перестроек |
| mFISH | Многоцветное хромосомное окрашивание комбинациями флуорохромов | Идентификация всех хромосом и компонентов транслокаций или маркерных хромосом |
| mBAND | Использование частично перекрывающихся регион-специфических зондов | Уточнение внутрихромосомных перестроек и локализации точек разрыва |
| Rx-FISH | Перекрёстная межвидовая гибридизация хромосомных зондов | Получение характерного многоцветного рисунка и анализ структурных аномалий |
| COBRA-FISH | Комбинаторное бинарное отношение флуоресцентных меток | Одновременное различение большого числа хромосомных мишеней |
| Обычная painting-FISH | Окрашивание одной или нескольких целых хромосом специфическими зондами | Подтверждение предполагаемой транслокации или происхождения хромосомного материала |
SKY и mFISH рассматриваются как близкие варианты многоцветного молекулярно-цитогенетического кариотипирования, поскольку дают функционально сопоставимый результат — индивидуальную цветовую идентификацию всех хромосом. Особенно ценны они при сложных кариотипах, когда стандартное G-бэндинг-исследование не позволяет надёжно определить происхождение дополнительного хромосомного материала. При этом равномерное окрашивание целой хромосомы ограничивает выявление небольших внутрихромосомных делеций, дупликаций и инверсий, поэтому при необходимости более высокой локальной разрешающей способности применяют регион-специфическую FISH, mBAND либо молекулярно-геномные методы.