2) бриллиантового крезилового синего; 10 секунд
3) метиленового синего; 1 секунду (+)
4) азур-эозина; 15 секунд
Правильным является кратковременное погружение препарата в забуференный раствор метиленового синего на 1 секунду. Толстая капля предназначена для выявления малярийных плазмодиев и других кровепаразитов: после последующего окрашивания происходит гемолиз эритроцитов, а возбудители концентрируются в небольшом объёме материала. Самофиксация изменяет белковую матрицу высохшей капли и препятствует полноценному вымыванию гемоглобина, из-за чего паразиты хуже визуализируются и возрастает количество артефактов.
Метиленовый синий в данном режиме не выполняет роль полноценного фиксирующего или окончательного окрашивающего реагента. Буфер поддерживает стабильный показатель pH, а односекундный контакт позволяет обработать поверхность препарата без чрезмерного связывания красителя и образования плотного фонового осадка. После обработки препарат промывают водой для удаления избытка реагента и высушивают; спиртовая фиксация при исследовании толстой капли не применяется, поскольку сохраняет эритроциты и нарушает принцип гемолиза.
| Метод или реагент | Основное назначение | Значение для препарата толстая капля |
|---|---|---|
| Толстая капля без спиртовой фиксации | Концентрация элементов крови и повышение чувствительности поиска паразитов | Оптимальна для обнаружения плазмодиев, но требует правильного гемолиза и осторожного обращения |
| Буферный метиленовый синий, 1 секунда | Предупреждение самофиксации при отсроченном окрашивании | Сохраняет пригодность препарата для последующего окрашивания по Романовскому—Гимзе |
| Метиленовый синий при длительной экспозиции | Избыточное окрашивание и накопление красителя | Увеличивает интенсивность фона, может маскировать паразитов и создавать осадок |
| Метанол или этанол | Коагуляционная фиксация клеточных белков | Для толстой капли нежелательны: эритроциты сохраняются, гемолиз затрудняется, чувствительность исследования снижается |
| Азур-эозиновые смеси | Окончательное окрашивание по типу Романовского—Гимзы | Используются на этапе выявления морфологических деталей, а не как краткая профилактическая обработка |
| Гематоксилин | Преимущественно ядерное окрашивание в гистологических методиках | Не соответствует стандартной подготовке толстой капли для поиска кровепаразитов |
| Бриллиантовый крезиловый синий | Суправитальная окраска, в частности для подсчёта ретикулоцитов | Не предназначен для предупреждения самофиксации и последующей диагностики малярии в толстой капле |
Качество результата зависит от соблюдения времени контакта, правильного pH буфера, полного удаления избытка красителя и равномерного высушивания. Перед постановкой серии исследований целесообразен контроль препарата с известной морфологией паразитов. При нарушении режима обработки возрастает риск ложного отрицательного результата из-за маскировки плазмодиев фоном или неполного гемолиза.