2) иммуно-ферментный анализ (ИФА) на антилептоспирозные антитела
3) полимеразная цепная реакция(ПЦР) на ДНК лептоспиры
4) классический бактериологический метод: посев крови на сахарный бульон
Реакция микроагглютинации лептоспир (РМА, MAT) является референсным серологическим методом специфической диагностики лептоспироза. Метод основан на взаимодействии антител сыворотки пациента с живыми культурами диагностических сероваров Leptospira: при наличии специфических антител происходит агглютинация лептоспир, которую оценивают микроскопически. РМА позволяет не только подтвердить наличие антител, но и ориентировочно определить серогруппу возбудителя.
Наиболее убедительным серологическим доказательством острой инфекции служит сероконверсия либо не менее чем четырехкратное нарастание титра антител в парных сыворотках, полученных в динамике заболевания. Существенное ограничение РМА связано с тем, что антитела появляются не сразу, поэтому в первые дни болезни отрицательный результат не исключает лептоспироз. В раннюю лептоспиремическую фазу диагностическую ценность имеет ПЦР, тогда как ИФА на IgM удобен как скрининговый метод, но его положительные результаты при необходимости подтверждают РМА.
Классическое культуральное выделение лептоспир обладает высокой специфичностью, однако микроорганизмы растут медленно и требуют специальных питательных сред и условий культивирования. Поэтому посев имеет ограниченное значение для оперативного клинического подтверждения заболевания и используется преимущественно в специализированных лабораториях и исследовательских целях.
| Метод | Что выявляет | Оптимальный период | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| РМА (MAT) | Специфические агглютинирующие антитела | Преимущественно со второй недели болезни | Референсный серологический метод; особенно информативна оценка титра в динамике |
| РМА парных сывороток | Динамику титра антител | Острая фаза и реконвалесценция | Сероконверсия или ≥4-кратное увеличение титра убедительно подтверждает недавнюю инфекцию |
| ИФА IgM | Антилептоспирозные IgM | После формирования гуморального ответа | Удобен для первичного скрининга; специфичность зависит от тест-системы |
| ПЦР | ДНК Leptospira | Особенно ранняя фаза болезни | Позволяет выявить возбудителя до появления диагностически значимого уровня антител |
| Культуральный метод | Жизнеспособные лептоспиры | Зависит от исследуемого материала и фазы инфекции | Специфичен, но медленен и технически сложен |
| Темнопольная микроскопия | Морфологически сходные со спирохетами микроорганизмы | Ранняя фаза при наличии лептоспир в материале | Ограниченная чувствительность и специфичность, поэтому не заменяет подтверждающие методы |
Выбор лабораторного исследования необходимо соотносить со сроком заболевания, поскольку лептоспиремия предшествует выраженному антительному ответу. В первые дни наиболее полезны методы прямого выявления возбудителя, прежде всего ПЦР, тогда как позднее возрастает диагностическая ценность серологии. РМА сохраняет значение референсного метода подтверждения серологического диагноза и позволяет оценивать динамику специфического иммунного ответа. Таким образом, отрицательный ранний серологический тест при характерной клинической картине требует повторного исследования в динамике.