2) цитохимический
3) иммунофлюоресцентный
4) суправитальный (+)
Для выявления ретикулоцитов наиболее часто применяют суправитальную окраску. Ретикулоциты — это незрелые эритроциты, в цитоплазме которых сохраняются остатки рибосомальной РНК и органелл. После окрашивания метиленовым синим или бриллиантовым крезиловым синим РНК преципитирует в виде сетчатой или зернистой структуры, благодаря чему клетки надежно отличают от зрелых эритроцитов.
Окраску проводят до фиксации мазка, поскольку суправитальные красители действуют на живые, еще не фиксированные клетки. Ретикулоциты подсчитывают среди определенного числа эритроцитов, обычно на 1000 клеток, и выражают результат в процентах или промилле. Для оценки эритропоэза используют также абсолютное количество ретикулоцитов и ретикулоцитарный индекс, позволяющие корректно интерпретировать показатель при анемии.
Окраска по Романовскому может выявлять полихроматофилию, соответствующую присутствию молодых эритроидных клеток, но не является оптимальным методом специфического подсчета ретикулоцитов. Цитохимические и иммунофлюоресцентные методики применяются преимущественно для специальных исследований, тогда как автоматические гематологические анализаторы используют флуоресцентное связывание красителей с РНК. Поэтому в классической лабораторной диагностике и при ручном подсчете правильным является суправитальный метод.
| Критерий | Суправитальная окраска | Практическое значение |
|---|---|---|
| Объект выявления | Остаточная рибосомальная РНК в незрелом эритроците | Специфическое распознавание ретикулоцитов |
| Основные красители | Новый метиленовый синий, бриллиантовый крезиловый синий | Формирование сетчатого или гранулярного преципитата РНК |
| Состояние клеток при окрашивании | Клетки не фиксируют предварительно | Сохраняется возможность реакции красителя с внутриклеточной РНК |
| Результат подсчета | Процентное или абсолютное число ретикулоцитов | Оценка активности костномозгового эритропоэза |
| Окраска по Романовскому | Вызывает преимущественно полихроматофилию | Может ориентировочно указывать на молодые формы, но не заменяет специальный подсчет |
| Автоматизированные методы | Флуоресцентная маркировка РНК с последующим анализом клеток | Повышает производительность и воспроизводимость исследования |
Количество ретикулоцитов отражает регенераторную активность костного мозга. Ретикулоцитоз наблюдается при усиленном восстановлении эритропоэза, например после кровопотери или начала эффективной терапии железодефицитной анемии. Низкий показатель при анемии свидетельствует о недостаточном ответе костного мозга. Интерпретацию следует проводить с учетом уровня гемоглобина, количества эритроцитов и клинической ситуации.