2) формалином 5%
3) физиологическим раствором
4) унитиолом (+)
Унитиол (натриевая соль димеркаптопропансульфоновой кислоты) является тиоловым восстановителем, который воздействует на дисульфидные связи иммуноглобулинов. Молекула IgM имеет пентамерную структуру: отдельные мономеры соединены межцепочечными дисульфидными связями. При инкубации с унитиолом эти связи разрываются, пентамер теряет пространственную организацию и выраженную агглютинирующую активность, что позволяет оценить вклад IgM отдельно от IgG.
IgG представляет собой мономерный иммуноглобулин и при стандартных условиях обработки унитиолом сохраняет антигенсвязывающую активность. Поэтому сравнение серологической реакции до и после восстановления позволяет косвенно определить наличие и соотношение антиэритроцитарных антител двух классов: исчезновение или резкое ослабление реакции указывает на IgM-компонент, сохранение реакции — на IgG-компонент. Этот принцип используют при дифференциальной характеристике холодовых и тепловых антител, а также при оценке клинической значимости ауто- и аллоантител.
Физиологический раствор выполняет роль изотонической среды и не разрушает избирательно иммуноглобулины. Сыворотка пациента является исследуемым материалом, а не реагентом для разделения классов антител; формалин фиксирует и сшивает белковые структуры, но не обеспечивает специфического удаления IgM. Следовательно, именно восстановительное действие унитиола лежит в основе селективной дифференциации IgM и IgG.
| Объект или реагент | Структурная особенность | Серологическая характеристика | Результат обработки унитиолом |
|---|---|---|---|
| IgM | Пентамер, субъединицы соединены дисульфидными связями | Многочисленные антигенсвязывающие центры; обычно вызывает агглютинацию в солевой среде | Деполимеризация и утрата значительной части агглютинирующей активности |
| IgG | Мономер с двумя антигенсвязывающими центрами | Чаще реагирует при 37 °C и выявляется в антиглобулиновом тесте | При стандартной экспозиции сохраняет активность и продолжает выявляться |
| Унитиол | Тиоловый восстановительный реагент | Изменяет дисульфидные связи белковых молекул | Обеспечивает преимущественное разрушение пентамерной структуры IgM |
| Физиологический раствор | Изотонический раствор электролитов | Поддерживает подходящие условия для реакции агглютинации | Не разделяет IgM и IgG по классовой принадлежности |
| Формалин | Фиксирующий и сшивающий белки альдегид | Может изменять антигенные и серологические свойства материала | Не является селективным средством инактивации IgM |
| Сыворотка пациента | Биологический материал, содержащий смесь иммуноглобулинов | Может включать антиэритроцитарные IgM, IgG и другие белки | Подлежит обработке реагентом, но сама по себе классы антител не разделяет |
Интерпретация метода должна учитывать, что унитиол не определяет класс антител непосредственно, а изменяет их функциональную активность перед повторным исследованием. Наиболее надежная оценка IgG-компонента проводится с использованием антиглобулиновой методики, а IgM оценивают по реакции до и после восстановительной обработки. Результаты следует сопоставлять с температурным диапазоном реакции, титром антител и клиническими данными.