2) методом солевой агглютинации
3) методом преципитации антител
4) методом нейтрализации антител
Скрининг антиэритроцитарных антител выполняют непрямым антиглобулиновым тестом (НАГТ), поскольку он выявляет свободные антитела, присутствующие в сыворотке или плазме пациента. В реакции используют стандартные эритроциты группы O с известным антигенным составом, что позволяет обнаружить клинически значимые аллоантитела независимо от ABO-принадлежности образца.
На первом этапе сыворотку пациента инкубируют с тестовыми эритроцитами при оптимальной температуре, обычно 37 °C. Если в образце имеются антитела, преимущественно иммуноглобулины класса G, они фиксируются на соответствующих антигенах эритроцитов. После отмывания добавляют антиглобулиновый реагент, содержащий антитела к человеческим IgG и/или компонентам комплемента; агглютинация сенсибилизированных эритроцитов расценивается как положительный результат.
Солевая агглютинация преимущественно выявляет крупные IgM-антитела, часто имеющие холодовую реактивность, и недостаточно чувствительна к неполным IgG-антителам. Преципитация и нейтрализация не являются стандартизованными методами скрининга антиэритроцитарных антител. После положительного НАГТ проводят идентификацию антител на панели эритроцитов, а при необходимости определяют их титр или оценивают клиническую значимость перед переливанием крови и ее компонентов.
| Метод или этап | Исследуемый материал | Основной диагностический признак | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Непрямой антиглобулиновый тест | Сыворотка пациента и стандартные эритроциты | Агглютинация после инкубации, отмывания и добавления антиглобулинового реагента | Скрининг клинически значимых свободных IgG- и комплементсвязывающих антител |
| Прямой антиглобулиновый тест | Эритроциты пациента | Выявление IgG или комплемента, уже фиксированных на эритроцитах in vivo | Диагностика аутоиммунного гемолиза, гемолитической болезни новорождённых и посттрансфузионных реакций; не заменяет скрининг сыворотки |
| Солевая агглютинация | Сыворотка и эритроциты в физиологическом растворе | Прямая агглютинация, чаще при участии IgM | Может обнаруживать холодовые антитела, но недостаточно чувствительна к большинству клинически значимых IgG |
| Идентификация антител на панели | Положительная сыворотка и набор типированных эритроцитов | Закономерное соответствие реакций антигенному профилю клеток | Установление специфичности антитела, например анти-D, анти-K или анти-E |
| Проба на индивидуальную совместимость | Сыворотка пациента и эритроциты донора | Отсутствие иммунологической реакции в условиях выбранной методики | Окончательная оценка совместимости перед переливанием эритроцитсодержащего компонента |
| Преципитация | Растворимые антиген-антительные комплексы | Образование осадка при взаимодействии растворимых компонентов | Не используется как стандартный способ выявления антител к антигенам эритроцитов |
| Нейтрализация антител | Сыворотка и растворимый антиген либо ингибирующий реагент | Ослабление или исчезновение реакции после связывания антител | Может применяться в отдельных специальных исследованиях, но не для рутинного скрининга |
Положительный скрининговый результат означает наличие антител, но не определяет их специфичность и клиническую опасность. Наибольшее значение имеют антитела, реагирующие при 37 °C и в антиглобулиновой фазе, поскольку они способны вызывать гемолиз после трансфузии или гемолитическую болезнь плода и новорождённого. Поэтому результат НАГТ должен быть подтверждён идентификацией антитела и подбором антиген-негативных совместимых эритроцитов.