2) Граму
3) Папаниколау (+)
4) Романовскому-Гимза
Влажная фиксация является обязательным этапом окрашивания по Папаниколау, применяемого главным образом для цитологического исследования эпителиальных клеток. Мазок сразу после нанесения фиксируют во влажной среде, чаще всего в 95% этиловом спирте либо с помощью спиртсодержащего аэрозоля. Это предотвращает высыхание клеток и сохраняет естественную структуру ядра, распределение хроматина, контуры ядерной мембраны и особенности цитоплазмы.
Метод Папаниколау включает ядерную окраску гематоксилином и цитоплазматические красители, в том числе Orange G и смесь EA. Его диагностическая ценность основана на четкой визуализации ядерных атипий: увеличения и гиперхромии ядер, неравномерности хроматина, изменения ядерно-цитоплазматического отношения. При высушивании на воздухе возникают сморщивание клеток, конденсация хроматина, вакуолизация цитоплазмы и искажение окраски, что может затруднить оценку дисплазии и злокачественных изменений.
Для микробиологических методов фиксация обычно проводится после высушивания мазка, поскольку их диагностическая задача иная: выявить бактерии, кислотоустойчивость или морфологию клеток крови. Поэтому влажная фиксация принципиально связана именно с цитологической техникой Папаниколау, где сохранение тонких морфологических деталей имеет решающее значение.
| Метод окрашивания | Основной объект исследования | Тип фиксации | Диагностическое значение фиксации |
|---|---|---|---|
| Папаниколау | Эпителиальные клетки, цитологический материал | Немедленная влажная фиксация в спирте или спиртсодержащем фиксаторе | Сохранение ядерной и цитоплазматической морфологии, предупреждение артефактов высыхания |
| Грам | Бактерии и клеточные элементы воспалительного экссудата | Высушивание на воздухе с последующей термической фиксацией | Прикрепление материала к стеклу и сохранение бактерий перед дифференцировкой по свойствам клеточной стенки |
| Циль–Нильсен | Кислотоустойчивые микобактерии | Обычно высушивание и фиксация нагреванием | Обеспечение фиксации мазка перед окраской фуксином и обесцвечиванием кислотно-спиртовым раствором |
| Романовский–Гимза | Клетки крови, паразиты, клеточные элементы воспаления | Высушивание на воздухе, затем фиксация метанолом | Сохранение клеточной морфологии и дифференциация ядерных и цитоплазматических структур |
| Высушивание мазка до влажной фиксации | Цитологический материал | Нарушение методики | Появление сморщивания, зернистости хроматина, артефактов цитоплазмы и снижения качества оценки атипии |
Качество результата по Папаниколау зависит не только от состава красителей, но и от интервала между приготовлением мазка и фиксацией. Оптимально фиксировать препарат немедленно, пока клеточная структура не подверглась воздушной дегидратации. При использовании жидкостной цитологии аналогичный принцип реализуется после переноса клеточного материала в стабилизирующий раствор. Таким образом, влажная фиксация обеспечивает достоверную оценку морфологических критериев предраковых и опухолевых поражений.