2) ФГА стимулированную культуру клеток периферической крови
3) культуру пунктата лимфатических узлов
4) культуру нестимулированных клеток селезенки
Основным материалом для цитогенетического исследования при остром миелобластном лейкозе является аспират костного мозга. Именно в костном мозге сосредоточен патологический миелоидный клон, а кратковременное культивирование клеток позволяет получить метафазные хромосомы для проведения стандартного кариотипирования. При этом обычно используют нестимулированную культуру, поскольку бластные клетки способны делиться без воздействия митогенов.
Кариотипирование костномозговых клеток выявляет числовые и структурные хромосомные аномалии, имеющие диагностическое, классификационное и прогностическое значение. К таким изменениям относятся t(8;21) с образованием RUNX1::RUNX1T1, inv(16) или t(16;16) с CBFB::MYH11, t(15;17) с PML::RARA, а также перестройки KMT2A и другие генетические нарушения, определяющие отдельные варианты острого миелоидного лейкоза в современных классификациях ВОЗ и ICC.
ФГА стимулирует преимущественно пролиферацию Т-лимфоцитов, поэтому такая обработка непригодна для целевого анализа миелоидного опухолевого клона и может привести к преобладанию нормальных метафаз. Периферическая кровь исследуется как дополнительный материал при выраженной бластемии, но костный мозг остается стандартным источником. Культура клеток лимфатического узла или нестимулированных клеток селезенки применяется лишь в специальных клинических ситуациях, например при поражении этих органов, и не относится к рутинной диагностике острого миелобластного лейкоза.
| Материал или метод | Диагностическая роль | Основное ограничение |
|---|---|---|
| Культура клеток костного мозга | Стандартный материал для получения метафаз и выявления клональных хромосомных нарушений | Недостаточная клеточность или отсутствие делящихся клеток могут снизить информативность |
| Нестимулированная культура клеток костного мозга | Предпочтительный режим при миелоидных неоплазиях; сохраняет представительство опухолевого клона | При низкой пролиферативной активности иногда требуется дополнительная молекулярная диагностика |
| Клетки периферической крови при бластемии | Могут быть исследованы вместо костного мозга при большом количестве циркулирующих бластов | При небольшом числе бластных клеток возможен ложноотрицательный или неполный результат |
| ФГА-стимулированная культура периферической крови | Оптимальна главным образом для стимуляции Т-лимфоцитов при конституционном кариотипировании | Не является методом стимуляции миелоидных бластов и может маскировать опухолевый клон |
| Культура пунктата лимфатического узла | Используется при подозрении на лимфоидную опухоль или экстрамедуллярное поражение | Не отражает типичный клеточный субстрат острого миелобластного лейкоза |
| Культура нестимулированных клеток селезенки | Имеет значение только при специальном исследовании поражения селезенки | Не является рутинным источником материала для диагностики острого миелобластного лейкоза |
Результаты стандартного кариотипирования дополняют флуоресцентной гибридизацией in situ, ПЦР и секвенированием, особенно если метафазы отсутствуют или необходимо быстро подтвердить конкретную перестройку. Для некоторых генетических вариантов выявление определяющей аномалии имеет самостоятельное классификационное значение даже при невысокой доле бластов. Совокупная оценка морфологии, иммунофенотипа, цитогенетики и молекулярных маркеров необходима для окончательной верификации заболевания и стратификации риска.