2) исключение хромосомного мозаицизма
3) исключение анеуплоидий по всем хромосомам набора
4) наиболее клинически значимых анеуплоидий (+)
Интерфазный FISH-анализ основан на гибридизации флуоресцентно меченных ДНК-зондов с определёнными участками хромосом в ядрах клеток эмбриона. Подсчёт числа флуоресцентных сигналов позволяет выявлять дисомию, моносомию или трисомию по тем хромосомам, которые включены в диагностическую панель. На практике чаще исследуют хромосомы 13, 18, 21, X и Y, поскольку их числовые нарушения наиболее часто связаны с тяжёлыми пороками развития, невынашиванием или рождением ребёнка с клинически значимым хромосомным синдромом; в расширенные панели могут включаться также хромосомы 16 и 22.
Поэтому правильным является утверждение о выявлении наиболее клинически значимых анеуплоидий. Отрицательный результат означает отсутствие признаков числовой аномалии только по исследованным хромосомам и в проанализированных клетках. Метод не позволяет гарантированно исключить анеуплоидии всех хромосом, поскольку число используемых зондов ограничено.
Интерфазный FISH также не предназначен для надёжного исключения сбалансированных перестроек: при транслокации или инверсии суммарное количество генетического материала может сохраняться, поэтому число сигналов останется нормальным. Мозаицизм может быть обнаружен лишь при попадании в биоптат клеток с аномальным клоном; исследование небольшого числа клеток не исключает его наличия во всём эмбрионе. Для оценки структурных перестроек применяют специализированное PGT-SR, а для более широкого анализа хромосомного набора — методы сравнительной геномной гибридизации или секвенирования нового поколения.
| Диагностическая задача | Возможности интерфазного FISH | Основное ограничение |
|---|---|---|
| Анеуплоидии хромосом 13, 18, 21 | Подсчёт сигналов позволяет выявить моносомию или трисомию | Информативность сохраняется только для хромосом, представленных в панели |
| Аномалии половых хромосом X и Y | Возможна оценка числа X- и Y-хромосом, например при моносомии X или дополнительных половых хромосомах | Не выявляются изменения участков, не покрытых соответствующими зондами |
| Анеуплоидии всех хромосом | Рутинный FISH-скрининг не обеспечивает полного исследования кариотипа | Для широкого анализа предпочтительны array-CGH или NGS |
| Сбалансированные транслокации и инверсии | Обычно не выявляются при сохранении количества генетического материала | Требуется PGT-SR с анализом конкретного структурного перестроения |
| Хромосомный мозаицизм | Может быть обнаружен при исследовании достаточного числа клеток разных клонов | Ограниченный биоптат может не содержать аномальные клетки |
| Механизм результата | Нормальный набор обычно соответствует двум сигналам для аутосомы; три сигнала указывают на трисомию | Атипичные или слабые сигналы могут затруднять интерпретацию |
| Клиническое значение | Позволяет отобрать эмбрионы без исследованных частых анеуплоидий | Не заменяет полноценную пренатальную диагностику |
Результат FISH следует интерпретировать с учётом исследованных хромосом, количества проанализированных клеток и качества гибридизации. Современные методы PGT-A имеют более широкий охват хромосомного набора и лучше подходят для выявления сегментарных дисбалансов. Даже при нормальном результате преимплантационного тестирования сохраняется остаточный риск мозаицизма и диагностических ошибок. В связи с этим при наступлении беременности рекомендуется подтверждающая пренатальная диагностика по клиническим показаниям.