2) 2,1
3) 2
4) 1,8 (+)
Показатель A260/A280 характеризует спектрофотометрическую чистоту препарата нуклеиновой кислоты. Азотистые основания ДНК преимущественно поглощают ультрафиолет при длине волны 260 нм, тогда как ароматические аминокислоты белков — около 280 нм. Для высокоочищенной двуцепочечной ДНК физиологически ожидаемое соотношение составляет примерно 1,8, поэтому данный показатель соответствует качественному образцу.
Снижение соотношения до 1,6 обычно указывает на примесь белков, фенола или других компонентов экстракционной системы, увеличивающих поглощение при 280 нм. Более высокие значения, около 2,0 и выше, могут быть характерны для РНК, а также возникать при низкой концентрации ДНК, погрешностях измерения или влиянии состава буфера. Поэтому интерпретация A260/A280 должна проводиться вместе с оценкой концентрации, профилем электрофореза и дополнительным показателем A260/A230.
Соотношение оптических плотностей является ориентировочным критерием пригодности ДНК для последующих молекулярно-генетических исследований — ПЦР, секвенирования, генотипирования и гибридизационных методов. При этом сам по себе нормальный показатель не подтверждает целостность молекул: деградация ДНК может сохраняться при удовлетворительной спектрофотометрической чистоте. Для малых количеств образца предпочтительно использовать флуориметрические методы количественной оценки, поскольку они обладают большей специфичностью к ДНК.
| Объект или результат измерения | Ориентировочное значение | Диагностическая интерпретация |
|---|---|---|
| Высокоочищенная двуцепочечная ДНК | A260/A280 ≈ 1,8 | Низкий уровень белковых и фенольных примесей; оптимальный показатель для ДНК |
| Высокоочищенная РНК | A260/A280 ≈ 2,0 | Физиологически более высокое соотношение вследствие особенностей состава и спектра поглощения РНК |
| Сниженное соотношение | Около 1,6 и ниже | Вероятна контаминация белками, фенолом или остаточными реагентами экстракции |
| Повышенное соотношение | Около 2,0–2,1 и выше | Возможна примесь РНК, низкая концентрация ДНК либо артефакт измерения |
| Соотношение A260/A230 для чистой ДНК | Примерно 2,0–2,2 | Отсутствие значимой контаминации солями, гуанидиновыми соединениями, углеводами и остатками буфера |
| Спектрофотометрическая концентрация | Зависит от A260 | Оценивает суммарное содержание нуклеиновых кислот, но не гарантирует специфичность именно для ДНК |
| Флуориметрическая оценка ДНК | Метод с ДНК-специфичным красителем | Более точное определение концентрации при низком содержании ДНК и наличии РНК или других примесей |
Таким образом, значение 1,8 является референсным ориентиром спектрофотометрической чистоты двуцепочечной ДНК. Отклонение показателя в меньшую сторону чаще свидетельствует о загрязнении белками, а в большую — о примеси РНК или методических артефактах. Перед клинически значимым исследованием необходимо дополнительно оценивать целостность ДНК и соответствие концентрации требованиям конкретной методики.