2) получается набор ярких и тусклых полос вдоль плеч хромосом
3) хромосомы прокрашиваются рутинно вдоль плеч
4) получается набор светлых и темных полос только вдоль коротких плеч хромосом
Правильный ответ: 1. G-методы дифференциального окрашивания выявляют характерный чередующийся рисунок светлых и тёмных полос на протяжении обоих плеч метафазных хромосом. Такой рисунок является воспроизводимым для каждой хромосомы и используется для её идентификации, определения положения центромеры, оценки длины и структуры хромосомных участков.
Классическое G-окрашивание выполняют после ограниченной обработки хромосом трипсином с последующим окрашиванием красителем Гимза. Тёмные G-полосы, как правило, соответствуют участкам, обогащённым АТ-парами, поздно реплицирующимся и относительно конденсированным; светлые полосы чаще содержат больше ГЦ-пар, реплицируются раньше и характеризуются иной белково-нуклеотидной структурой. После анализа рисунка полос составляют кариотип и описывают перестройки в соответствии с международной системой ISCN.
Окрашивание не является равномерным рутинным прокрашиванием хромосом и не ограничивается короткими плечами: полосы формируются вдоль коротких и длинных плеч, за исключением участков, где разрешение метода недостаточно. Чередование ярких и тусклых флуоресцентных участков более характерно для Q-окрашивания хинакрином, тогда как для G-метода используют преимущественно термины тёмные и светлые полосы.
| Метод или вариант окрашивания | Основной принцип | Характер изображения | Диагностическое применение |
|---|---|---|---|
| G-окрашивание | Ограниченная трипсинизация и окрашивание по Гимзе | Чередование тёмных и светлых полос вдоль обоих плеч хромосом | Рутинное кариотипирование, выявление анеуплоидий и крупных структурных перестроек |
| Q-окрашивание | Флуоресцентное окрашивание хинакрином | Яркие и тусклые флуоресцентные участки, особенно информативные для некоторых АТ-богатых областей | Идентификация отдельных хромосом и уточнение некоторых перестроек; в настоящее время применяется ограниченно |
| R-окрашивание | Термическая или химическая обработка с последующим окрашиванием | Рисунок полос, обратный G-полосам; лучше выявляются теломерные и ГЦ-богатые участки | Анализ терминальных отделов хромосом и перестроек, недостаточно видимых при G-окрашивании |
| C-окрашивание | Избирательная демонстрация конститутивного гетерохроматина | Интенсивное окрашивание центромерных и некоторых других гетерохроматиновых районов | Оценка вариантов центромерного гетерохроматина и отдельных хромосомных полиморфизмов |
| Ag-NOR-метод | Импрегнация серебром белков, связанных с активными ядрышковыми организаторами | Сереброположительные участки в районах рДНК акроцентрических хромосом | Оценка активности ядрышковых организаторов, а не построение полного кариотипа |
| Высокодетальное G-окрашивание | Исследование хромосом на более ранней стадии конденсации | Увеличенное число, но меньший размер полос | Обнаружение более мелких делеций, дупликаций и других структурных изменений |
G-полосы имеют последовательную нумерацию от центромеры к теломере и формируют цитогенетический штрихкод каждой хромосомы. Диагностическая значимость метода определяется разрешающей способностью препарата и качеством метафазных пластинок. При подозрении на субмикроскопические изменения G-кариотип дополняют FISH, хромосомным микроматричным анализом или секвенированием. Таким образом, G-окрашивание остаётся базовым методом классической цитогенетики для оценки числа и крупных структурных особенностей хромосом.