2) радиоактивных изотопов
3) гипотонического раствора
4) серебра
Технология FISH (fluorescence in situ hybridization, флуоресцентная гибридизация in situ) основана на применении ДНК-зондов, комплементарных определённому участку генома и меченных флуорохромом. После денатурации ДНК зонд гибридизуется с целевой последовательностью непосредственно в интерфазном ядре или на метафазной хромосоме. При микроскопии в соответствующем спектре регистрируют число, расположение и сочетание флуоресцентных сигналов.
Такой принцип позволяет выявлять микроделеции и дупликации, анеуплоидии, амплификацию генов и хромосомные перестройки, включая транслокации. Для FISH не обязательны делящиеся клетки, поэтому метод применим к интерфазным ядрам и обеспечивает быстрый анализ при подозрении на конкретную генетическую аномалию. Радиоактивная метка относится к историческим методам гибридизации, гипотоническая обработка используется лишь на этапе подготовки некоторых хромосомных препаратов, а серебрение применяется в других цитогенетических методиках.
| Тип FISH-зонда | Основной диагностический принцип | Примеры применения |
|---|---|---|
| Локус-специфический | Гибридизация с уникальной последовательностью определённого гена или участка хромосомы | Микроделеции, дупликации, амплификация гена, например HER2 |
| Центромерный | Связывание с альфа-сателлитными последовательностями центромер | Определение числа копий хромосом при трисомиях, моносомиях и мозаицизме |
| Break-apart | Два флуоресцентных сигнала, расположенных рядом в норме, расходятся при разрыве и перестройке исследуемого локуса | Выявление реаранжировок генов независимо от партнёра по транслокации |
| Dual-fusion | Появление слитого сигнала при сближении и слиянии двух генов, расположенных на разных хромосомах | Подтверждение специфических реципрокных транслокаций, включая некоторые лейкозы |
| Цельнохромосомный painting-зонд | Множественная окраска последовательностей, распределённых по всей хромосоме | Уточнение сложных перестроек и происхождения дополнительного хромосомного материала |
| Субтеломерный зонд | Гибридизация с концевыми участками хромосом | Поиск криптических терминальных делеций и несбалансированных перестроек |
Интерпретация результата проводится с учётом нормального числа сигналов для конкретного зонда, их пространственного расположения и соотношения контрольных и диагностических сигналов. FISH является целевым методом и не заменяет полное кариотипирование или молекулярное исследование всего генома, если предполагается неизвестная перестройка. Выбор набора зондов определяется клинической задачей и предполагаемой хромосомной аномалией. Для повышения диагностической надёжности результаты сопоставляют с клиническими данными и при необходимости подтверждают другим методом.