2) активности ферментов
3) Х- и Y-полового хроматина
4) кариотипа
Правильный ответ — определение альфа-фетопротеина. Альфа-фетопротеин (АФП) является растворимым эмбриональным белком, присутствующим преимущественно в амниотической жидкости и сыворотке крови беременной, а не структурным компонентом клеток амниотической жидкости. Поэтому его определяют непосредственно в амниотической жидкости, обычно иммунологическими методами, а не в клеточном материале после культивирования.
АФП синтезируется желточным мешком и печенью плода, затем поступает в амниотическую жидкость, в том числе с мочой плода. Повышенная концентрация может наблюдаться при открытых дефектах нервной трубки, передней брюшной стенки, многоплодной беременности и некоторых других состояниях; результат оценивают с учетом срока гестации и данных ультразвукового исследования. Культивирование амниоцитов предназначено для размножения жизнеспособных клеток и получения клеточного материала, но не для определения концентрации растворенного белка амниотической жидкости.
В культивированных амниоцитах, напротив, возможно исследовать внутриклеточную активность ферментов после разрушения клеток, выявлять половой хроматин в интерфазных ядрах и проводить цитогенетический анализ. Для кариотипирования клетки останавливают на стадии метафазы, когда хромосомы максимально спирализованы и доступны для микроскопического анализа. Таким образом, принципиальное различие связано с объектом исследования: АФП относится к жидкой фазе биоматериала, а перечисленные клеточные методы — к ядру или ферментным системам амниоцитов.
| Исследуемый показатель | Основной материал | Метод исследования | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Альфа-фетопротеин | Амниотическая жидкость или сыворотка беременной | Иммунохимическое количественное определение | Скрининг риска дефектов нервной трубки и передней брюшной стенки; не является характеристикой культивируемой клетки |
| Активность ферментов | Лизат культивированных амниоцитов | Биохимический ферментный анализ | Выявление отдельных наследственных болезней обмена веществ и лизосомных болезней накопления |
| X-хроматин | Интерфазные ядра амниоцитов | Цитологическое выявление телец Барра | Ориентировочная оценка наличия инактивированной X-хромосомы |
| Y-хроматин | Интерфазные ядра амниоцитов | Флуоресцентное выявление участков Y-хромосомы | Ориентировочная идентификация клеток с Y-хромосомой |
| Кариотип | Культивированные амниоциты | Анализ метафазных хромосом после окрашивания | Диагностика числовых и крупных структурных хромосомных аномалий |
| Молекулярно-генетическое исследование | ДНК амниоцитов или амниотической жидкости | ПЦР, FISH, QF-PCR, секвенирование | Выявление конкретных генетических вариантов и микроделеций; культура требуется не всегда |
Определение АФП и цитогенетическое исследование отвечают на разные диагностические вопросы и требуют разных фракций биоматериала. Концентрация АФП не позволяет установить кариотип плода и не заменяет ультразвуковую или молекулярную диагностику. При подозрении на хромосомную патологию предпочтение в современных протоколах часто отдают QF-PCR, FISH или хромосомному микроматричному анализу. Классическое культивирование амниоцитов сохраняет значение для получения метафазных хромосом и выполнения ряда биохимических исследований.