2) стандартную сыворотку АВ0
3) стандартную сыворотку антирезус
4) цоликлон анти-D-супер
Для постановки пробы Кумбса используют антиглобулиновую антисыворотку — реагент, содержащий антитела против иммуноглобулинов человека и/или компонентов комплемента. В прямом антиглобулиновом тесте она выявляет эритроциты, уже сенсибилизированные in vivo иммуноглобулином класса IgG или фрагментами комплемента. Антиглобулиновые антитела связываются с молекулами, фиксированными на поверхности эритроцитов, и вызывают их видимую агглютинацию.
В непрямой пробе Кумбса исследуемую сыворотку предварительно инкубируют со стандартными эритроцитами, после чего добавляют антиглобулиновый реагент. Положительная реакция свидетельствует о наличии в сыворотке неполных, преимущественно IgG-антител, способных сенсибилизировать эритроциты; метод применяют для выявления аллоантител, подбора совместимой крови и обследования беременных на резус- и другие эритроцитарные антитела. Таким образом, принцип теста основан не на определении конкретного антигена системы ABO или Rh, а на обнаружении антител, связанных с эритроцитами либо способных связаться с ними.
Стандартная сыворотка системы ABO, антирезусная сыворотка и цоликлон анти-D предназначены для прямого определения эритроцитарных антигенов по реакции агглютинации. Они не являются антиглобулиновыми реагентами и поэтому не заменяют сыворотку Кумбса.
| Метод или реагент | Что определяется | Основной материал | Механизм реакции | Типичное применение |
|---|---|---|---|---|
| Прямая проба Кумбса | IgG и/или C3 на эритроцитах пациента | Отмытые эритроциты | Антиглобулиновая сыворотка образует мостики между сенсибилизированными клетками | Аутоиммунная гемолитическая анемия, гемолитическая болезнь новорождённых, лекарственный гемолиз |
| Непрямая проба Кумбса | Свободные антиэритроцитарные антитела в сыворотке | Сыворотка пациента и тест-эритроциты | Антитела сначала фиксируются на тест-эритроцитах, затем выявляются антиглобулиновым реагентом | Скрининг антител, проба на совместимость, иммуногематологическое обследование беременных |
| Антиглобулиновая антисыворотка | Человеческий IgG и/или компоненты комплемента на эритроцитах | Сенсибилизированные эритроциты | Реагент связывает Fc-фрагменты IgG либо компоненты C3, обеспечивая агглютинацию | Ключевой реагент обеих разновидностей пробы Кумбса |
| Стандартная сыворотка ABO | Антигены A и/или B на эритроцитах | Эритроциты обследуемого | Готовые анти-A или анти-B антитела вызывают прямую агглютинацию | Определение группы крови по системе ABO |
| Стандартная антирезусная сыворотка | Преимущественно антиген D системы Rh | Эритроциты обследуемого | Анти-D связывается с RhD-антигеном и вызывает агглютинацию при его наличии | Определение резус-принадлежности |
| Цоликлон анти-D-супер | Антиген D | Эритроциты обследуемого | Моноклональные анти-D-антитела непосредственно реагируют с RhD-антигеном | Типирование RhD, но не выявление неполных антител методом Кумбса |
Положительная прямая проба Кумбса имеет диагностическое значение только в совокупности с клиническими и лабораторными признаками гемолиза, включая анемию, повышение непрямого билирубина и лактатдегидрогеназы, снижение гаптоглобина. При отрицательном результате следует учитывать низкую плотность иммуноглобулинов на эритроцитах, наличие антител классов, плохо выявляемых применяемым реагентом, и технические ошибки. Для повышения информативности используют полиспецифическую антиглобулиновую сыворотку либо раздельные моноспецифические реагенты анти-IgG и анти-C3.