2) ЕАС-РОК
3) РТБЛ на ЛПС
4) М-РОК
Реакция бласттрансформации лимфоцитов с фитогемагглютинином оценивает функциональную активность Т-лимфоцитов. Фитогемагглютинин является поликлональным Т-клеточным митогеном: он связывает мембранные гликопротеины и запускает активационные сигналы, приводящие к синтезу интерлейкина-2, увеличению размеров клеток, переходу лимфоцитов в бластные формы и их пролиферации. Интенсивность ответа определяют по доле трансформированных клеток, включению меченых нуклеотидов либо разведению пролиферационного красителя и сопоставляют с нестимулированным контролем.
Таким образом, тест характеризует не только наличие Т-клеток, но и их способность отвечать на неспецифический активирующий стимул. Снижение митоген-индуцированной пролиферации возможно при первичных и вторичных клеточных иммунодефицитах, тяжелых инфекциях, онкогематологических заболеваниях, иммуносупрессивной терапии и выраженных метаболических нарушениях. Розеточные реакции преимущественно отражают наличие определенных мембранных рецепторов и численность клеточных популяций, поэтому не являются прямым эквивалентом функционального пролиферативного теста.
| Метод или параметр | Основная мишень | Оцениваемое свойство | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| РТБЛ с фитогемагглютинином | Преимущественно Т-лимфоциты | Активация и пролиферация в ответ на поликлональный митоген | Функциональная оценка клеточного звена иммунитета |
| РТБЛ с липополисахаридом | Преимущественно В-клеточное и моноцитарное звено | Ответ на бактериальный эндотоксин через врожденные сигнальные пути | Не является специфическим тестом функции Т-лимфоцитов |
| ЕАС-розеткообразование | Клетки с рецепторами к компонентам комплемента, исторически — В-лимфоциты | Способность связывать комплексы эритроцит–антитело–комплемент | Преимущественно количественная идентификация популяции, а не оценка пролиферации |
| Другие розеточные тесты | Клетки с определенными поверхностными рецепторами | Формирование комплексов с индикаторными эритроцитами | Исторические фенотипические методы с ограниченной специфичностью |
| Стимуляционный индекс | Культура лимфоцитов | Отношение пролиферации стимулированных клеток к нестимулированному контролю | Позволяет количественно оценить выраженность митогенного ответа |
| Проточная цитометрия CD3/CD4/CD8 | Т-клетки и их основные субпопуляции | Количество и фенотип лимфоцитов | Дополняет функциональный тест, но сама по себе не доказывает сохранность функции |
| Современный анализ пролиферации | Отдельные субпопуляции лимфоцитов | Деление клеток по разведению флуоресцентного красителя и экспрессии маркеров активации | Более точная стандартизированная альтернатива микроскопической оценке бласттрансформации |
Результат РТБЛ необходимо интерпретировать совместно с абсолютным числом лимфоцитов, иммунofenотипированием и клиническими данными. Нормальное количество CD3-положительных клеток не исключает функционального дефекта их активации или пролиферации. На результат также влияют качество образца, время до постановки культуры, принимаемые лекарственные препараты и наличие острого заболевания. В современной лабораторной практике функциональные тесты Т-клеток часто выполняют методами проточной цитометрии, однако их патофизиологический принцип соответствует классической реакции бласттрансформации с Т-клеточным митогеном.