2) определении нуклеиновой кислоты возбудителя (+)
3) выделении возбудителя из материала и определении его вида
4) определении титра антител в сыворотке крови к возбудителю
Молекулярно-генетическая диагностика основана на непосредственном выявлении специфического фрагмента ДНК или РНК инфекционного агента в исследуемом биоматериале. Наиболее распространённый вариант — полимеразная цепная реакция (ПЦР), при которой участок генома возбудителя многократно амплифицируется с помощью праймеров, комплементарных целевой последовательности. Для РНК-содержащих вирусов применяют обратную транскрипцию с последующей ПЦР (ОТ-ПЦР), а в режиме реального времени возможно не только качественное, но и количественное определение нуклеиновой кислоты.
Диагностическим критерием является обнаружение специфической нуклеотидной последовательности в клиническом материале: мазке, крови, моче, ликворе, кале, мокроте или другом образце в зависимости от предполагаемой инфекции. Метод отличается высокой аналитической чувствительностью и специфичностью, позволяет выявлять возбудителя до формирования иммунного ответа и часто применяется при малом количестве микроорганизмов или невозможности их культивирования. При этом положительный результат необходимо интерпретировать с учётом качества забора материала, риска контаминации и возможного сохранения нуклеиновой кислоты после прекращения жизнеспособности возбудителя.
Микроскопия выявляет морфологические признаки микроорганизмов, культуральный метод требует выделения и идентификации возбудителя, а серологическое исследование определяет антитела хозяина. Следовательно, эти подходы оценивают соответственно морфологию, жизнеспособный микроорганизм или иммунный ответ, тогда как молекулярно-генетический метод непосредственно устанавливает наличие генетического материала инфекционного агента.
| Метод | Что выявляется | Основной диагностический принцип | Особенности интерпретации |
|---|---|---|---|
| Молекулярно-генетический | Специфическая ДНК или РНК возбудителя | Амплификация, гибридизация или секвенирование целевой нуклеотидной последовательности | Высокая чувствительность и специфичность; результат зависит от правильного забора и транспортировки материала |
| Микроскопический | Клетки микроорганизмов, их морфология и расположение | Исследование окрашенного или нативного препарата под микроскопом | Быстрый метод, но чувствительность и точность зависят от количества возбудителя и его морфологических признаков |
| Культуральный | Жизнеспособный возбудитель | Посев биоматериала на питательные среды или в клеточную культуру с последующей идентификацией | Позволяет определить чувствительность к антимикробным препаратам, но требует времени и подходящих условий культивирования |
| Серологический | Специфические антитела, иногда антиген | Иммунологическая реакция антиген–антитело | Антитела могут отсутствовать в ранние сроки; диагностически значимы сероконверсия или нарастание титра в парных сыворотках |
| Антигенный экспресс-тест | Белковые антигены возбудителя | Иммунохроматографическое или иное иммунологическое выявление антигена | Быстрый результат, однако чувствительность обычно ниже, чем у методов амплификации нуклеиновых кислот |
| Секвенирование | Нуклеотидная последовательность генома или его фрагмента | Определение порядка нуклеотидов и сопоставление с референсными последовательностями | Используется для видовой идентификации, выявления мутаций, генотипирования и эпидемиологического мониторинга |
Нуклеиновая кислота является молекулярным маркером, позволяющим обнаружить возбудителя непосредственно в образце пациента. Количественная ПЦР может использоваться для оценки вирусной или бактериальной нагрузки, но её показатель не всегда равен числу жизнеспособных микроорганизмов. Для подтверждения клинического диагноза результат сопоставляют с симптомами, сроками заболевания и данными других исследований. При контроле лечения важно учитывать динамику показателя и биологические особенности конкретного возбудителя.