2) неинвазивный
3) хроматографический
4) ферментативный (+)
Ферментативное определение билирубина основано на специфическом окислении билирубина билирубиноксидазой до биливердина. В ходе реакции уменьшается оптическая плотность образца в области поглощения билирубина, а величина этого снижения пропорциональна его концентрации. Высокая субстратная специфичность фермента обеспечивает хорошую аналитическую селективность и снижает влияние гемоглобина, липемии, белковых компонентов и ряда лекарственных веществ по сравнению с традиционными колориметрическими реакциями.
Ферментативные методики характеризуются высокой воспроизводимостью, возможностью автоматизации и широким линейным диапазоном, поэтому особенно пригодны для количественного определения билирубина в рутинной клинико-диагностической лаборатории. Диазореакция остается распространенной, однако ее результат зависит от состава реагентов, кислотности среды и присутствия интерферирующих хромогенов. Транскутанное измерение является скрининговым, преимущественно неонатологическим методом, а хроматография применяется главным образом для раздельного анализа билирубиновых фракций и решения специальных исследовательских задач.
| Метод | Аналитический принцип | Основные преимущества | Ограничения |
|---|---|---|---|
| Ферментативный | Окисление билирубина билирубиноксидазой с фотометрической регистрацией уменьшения поглощения | Высокая специфичность, воспроизводимость и удобство автоматизации | Зависимость от качества ферментного реагента и условий хранения набора |
| Диазотирующий | Образование окрашенного азобилирубина при реакции с диазореактивом | Доступность, стандартизированность, широкое применение | Возможны неспецифические реакции и влияние состава реакционной среды |
| Хроматографический | Разделение билирубина и его фракций по физико-химическим свойствам | Высокая селективность, идентификация отдельных молекулярных форм | Сложность, высокая стоимость и ограниченная пригодность для массовых исследований |
| Неинвазивный транскутанный | Оценка спектрального поглощения света билирубином в коже | Быстрота, отсутствие забора крови, удобство скрининга новорожденных | Результат зависит от гестационного возраста, пигментации кожи и фототерапии |
| Прямая спектрофотометрия | Измерение собственного поглощения билирубина без специфической химической реакции | Быстрое выполнение и простота | Выраженное влияние гемолиза, мутности и других поглощающих веществ |
| Выбор лабораторного подхода | Сопоставление клинической задачи с аналитическими характеристиками метода | Ферментативный метод оптимален для точного рутинного количественного анализа | При необходимости фракционирования предпочтительны специализированные методы |
Достоверность результата зависит не только от аналитического принципа, но и от соблюдения преаналитических требований. Образец необходимо защищать от света, поскольку билирубин подвергается фотодеградации, приводящей к его занижению. Выраженный гемолиз и липемия также могут искажать фотометрическое измерение, поэтому лаборатория должна применять индексы интерференции и внутренний контроль качества. При клиническом несоответствии результата целесообразно повторное исследование или подтверждение альтернативным методом.