2) петлевая изотермическая амплификация, реакция непрямой гемагглютинации
3) реакция иммунофлуоресценции, полимеразная цепная реакция (+)
4) реакция связывания комплемента, реакция встречной иммунодиффузии
Пневмоцистоз вызывается грибом Pneumocystis jirovecii, который преимущественно поражает альвеолярный эпителий у пациентов с выраженным иммунодефицитом. Для экспресс-диагностики применяют методы прямого обнаружения возбудителя в респираторном материале: бронхоальвеолярном лаваже, индуцированной мокроте, реже — в трахеальном аспирате. Реакция прямой иммунофлуоресценции основана на связывании меченых флуорохромом моноклональных антител с антигенами пневмоцист; при микроскопии выявляются ярко светящиеся цисты и другие формы возбудителя.
Полимеразная цепная реакция выявляет специфические фрагменты ДНК P. jirovecii после их многократной амплификации; в режиме real-time PCR дополнительно возможна количественная оценка генетического материала. Высокая аналитическая чувствительность ПЦР особенно важна при малом количестве возбудителя, однако положительный результат необходимо сопоставлять с клиническими проявлениями и данными компьютерной томографии, поскольку обнаружение ДНК может отражать колонизацию дыхательных путей, а не активную пневмонию. Серологические реакции, включая реакцию связывания комплемента, встречную иммунодиффузию и непрямую гемагглютинацию, определяют преимущественно антитела или растворимые антигены и не обеспечивают надежного прямого выявления пневмоцист в биоматериале.
| Метод | Что выявляет | Основной материал | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Прямая иммунофлуоресценция | Антигены и морфологические формы P. jirovecii | Бронхоальвеолярный лаваж, индуцированная мокрота | Быстрое прямое подтверждение наличия возбудителя при достаточной концентрации пневмоцист |
| ПЦР | Специфические последовательности ДНК P. jirovecii | Бронхоальвеолярный лаваж, мокрота, трахеальный аспират | Высокочувствительное обнаружение генетического материала; количественные результаты помогают оценивать вероятность активной инфекции |
| Микроскопия с окраской | Цисты или трофические формы возбудителя | Респираторные образцы | Доступный метод, но чувствительность ниже, особенно при малой микробной нагрузке |
| Непрямая иммунофлуоресценция и серологические тесты | Антитела в сыворотке | Кровь | Ограниченное значение из-за распространенного носительства и невозможности надежно отличить текущую инфекцию от перенесенного контакта |
| Реакция связывания комплемента | Иммунологическое взаимодействие антител и антигенов | Сыворотка | Не является методом прямого обнаружения пневмоцист в биоматериале; в современной диагностике применяется ограниченно |
| Встречная иммунодиффузия и иммуноэлектрофорез | Растворимые антигены или антитела по линиям преципитации | Сыворотка или экстракты материала | Недостаточная чувствительность и более низкая оперативность для диагностики пневмоцистной пневмонии |
| Непрямая гемагглютинация | Антитела, вызывающие агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов | Сыворотка | Серологический, а не прямой метод выявления возбудителя; не подтверждает активную инфекцию самостоятельно |
Наиболее убедительным диагностическим подходом является сочетание выявления P. jirovecii в респираторном материале с признаками гипоксемической пневмонии и характерными двусторонними интерстициальными изменениями на КТ. Отрицательный результат исследования индуцированной мокроты не исключает заболевание, если использован менее чувствительный метод или образец получен некачественно; в такой ситуации предпочтителен бронхоальвеолярный лаваж. Результаты ПЦР следует интерпретировать вместе с клиническим состоянием пациента, уровнем иммунодефицита и маркерами тяжести, включая газовый состав крови и концентрацию β-D-глюкана.