2) культивацию вирусов на куриных эмбрионах
3) исследование титра антител в парных сыворотках
4) иммуноферментный анализ
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) относится к прямым методам диагностики: она выявляет генетический материал возбудителя непосредственно в клиническом образце. В ходе реакции амплифицируется специфический участок ДНК, а для РНК-содержащих вирусов предварительно выполняется обратная транскрипция (ОТ-ПЦР). Метод отличается высокой аналитической чувствительностью и специфичностью, дает результат в короткие сроки, требует небольшого объема материала и не зависит от жизнеспособности микроорганизма.
У новорожденных ПЦР применяют для исследования крови, мочи, ликвора, мазков и других образцов в зависимости от предполагаемого возбудителя и клинической ситуации. Например, врожденную цитомегаловирусную инфекцию подтверждают обнаружением ДНК вируса в моче или слюне в первые 21 сутки жизни; более позднее выявление не позволяет надежно отличить врожденное инфицирование от постнатального. Определение антител в парных сыворотках и иммуноферментный анализ, направленный на выявление антител, являются преимущественно серологическими, то есть косвенными методами, а культивирование на куриных эмбрионах в современной неонатальной практике ограничено.
| Метод | Что выявляет | Основные преимущества | Ограничения и диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| ПЦР/ОТ-ПЦР | ДНК или РНК возбудителя | Высокая чувствительность, специфичность и быстрота; возможно исследование небольшого объема материала | Результат необходимо сопоставлять со сроком забора, видом образца и клиническими данными; возможны ложноположительные результаты при контаминации |
| Культивирование на куриных эмбрионах | Жизнеспособный вирус, способный размножаться в эмбриональной ткани | Прямое подтверждение наличия инфекционного агента | Длительность, трудоемкость, ограниченный спектр культивируемых вирусов и более низкая практическая доступность |
| Вирусологическое культивирование в клеточной культуре | Живой возбудитель с оценкой его репликации | Позволяет подтвердить инфекционный процесс и иногда получить изолят для дополнительных исследований | Медленный метод, требующий специализированной лаборатории; во многом вытеснен молекулярной диагностикой |
| Исследование титра антител в парных сыворотках | Изменение уровня специфических антител во времени | Нарастание титра может подтверждать недавнее инфицирование | Требует повторного забора крови; материнские IgG затрудняют интерпретацию у новорожденного |
| ИФА на антитела | Специфические IgM, IgG и иногда динамику их концентрации | Доступность, возможность массового обследования и количественной оценки | Относится преимущественно к косвенной диагностике; IgM могут отсутствовать или быть неспецифичными, а IgG могут иметь материнское происхождение |
| ИФА на антиген | Антиген возбудителя | Может быть прямым методом и давать быстрый результат | Чувствительность зависит от концентрации антигена и качества тест-системы; применяется не для всех возбудителей |
Положительный результат ПЦР подтверждает присутствие генетического материала возбудителя, но сам по себе не всегда отражает активность инфекции или тяжесть заболевания. Для установления врожденного характера инфекции принципиальны правильные сроки забора материала и использование образца, наиболее информативного для конкретного патогена. Отрицательный результат не исключает инфекцию при позднем исследовании, низкой вирусной нагрузке или нарушении транспортировки материала. Поэтому лабораторное заключение оценивают совместно с данными осмотра, анамнеза матери и инструментального обследования новорожденного.