2) на мембране CD5 и CD2
3) на мембране CD7
4) внутриклеточную CD3, определенную антителами к эпсилон-цепи рецептора (+)
Для установления Т-линейной дифференцировки при остром лейкозе смешанного фенотипа решающим является выявление внутриклеточного CD3 с помощью антител к ε-цепи комплекса CD3/T-клеточного рецептора. Этот белок появляется на ранних этапах Т-клеточного созревания в цитоплазме, ещё до формирования полноценного поверхностного TCR/CD3-комплекса, поэтому его обнаружение является высокоспецифичным признаком принадлежности бластов к Т-клеточной линии.
CD2, CD5 и особенно CD7 могут экспрессироваться при Т-лимфобластном лейкозе, однако ни один из этих маркеров, взятый изолированно, не является достаточным для подтверждения Т-линейности. CD7 способен выявляться при некоторых миелоидных неоплазиях, а CD2 и CD5 могут иметь вариабельную или аберрантную экспрессию. Поэтому в классификационных критериях ВОЗ именно цитоплазматический CD3, выявленный антителами к ε-цепи, рассматривается как специфический Т-линейный маркер; его обнаружение интерпретируют совместно с признаками другой линии, например миелоидной или В-клеточной.
| Направление дифференцировки | Ключевые диагностические маркеры | Интерпретация при лейкозе смешанного фенотипа |
|---|---|---|
| Т-клеточная линия | Внутриклеточный или поверхностный CD3; для внутриклеточного CD3 — антитела к ε-цепи | Специфический критерий Т-линейности; внутриклеточный CD3 особенно важен на ранних стадиях созревания |
| В-клеточная линия | Сильная экспрессия CD19 в сочетании с CD79a, цитоплазматическим CD22 или CD10 | Подтверждает В-линейную дифференцировку при соответствии установленным комбинациям маркеров |
| Миелоидная линия | Миелопероксидаза; при моноцитарной дифференцировке — CD11c, CD14, CD64, лизоцим и другие соответствующие признаки | Необходима для доказательства миелоидного компонента смешанного фенотипа |
| CD7 | Ранний Т-/NK-ассоциированный антиген | Поддерживает Т-клеточную направленность, но не является самостоятельным доказательством Т-линейности из-за возможной экспрессии при миелоидных лейкозах |
| CD2 и CD5 | Антигены, часто встречающиеся на Т-лимфобластах | Имеют вспомогательное значение; изолированная экспрессия недостаточна для отнесения бластов к Т-линии |
| Метод определения CD3 | Многоцветная проточная цитометрия, иммуногистохимическое исследование | Оценивают локализацию антигена и специфичность антител; цитоплазматический CD3 следует отличать от неспецифического окрашивания |
Диагноз острого лейкоза смешанного фенотипа устанавливают при подтверждённой экспрессии признаков двух или более клеточных линий у одной популяции бластов либо при наличии соответствующих клональных популяций, если это предусмотрено применяемой классификацией. Оценка должна выполняться расширенной панелью проточной цитометрии с учётом интенсивности и локализации экспрессии антигенов. Выявление цитоплазматического CD3 имеет большее диагностическое значение, чем наличие отдельных Т-ассоциированных антигенов. Результаты иммунophenотипирования сопоставляют с морфологией, цитохимией, цитогенетическими и молекулярно-генетическими данными.