2) этиловый спирт 70%
3) формалин 10% (+)
4) этиловый спирт 96 %
10% нейтральный забуференный формалин является наиболее распространённым фиксатором для препаратов, предназначенных для световой микроскопии. Он представляет собой водный раствор формальдегида с рабочей концентрацией около 4%. Формальдегид образует метиленовые мостики между белковыми молекулами, стабилизируя тканевые структуры, подавляя аутолиз и препятствуя посмертному бактериальному разложению.
Преимуществами формалина являются хорошее сохранение общей архитектоники органов, совместимость с рутинной парафиновой проводкой и большинством гистологических окрасок, доступность и возможность фиксации относительно крупных фрагментов. Оптимальным считается соотношение объёма фиксатора и ткани не менее 10:1; толщина фрагмента обычно не должна превышать 4–5 мм. Недостаточная фиксация вызывает аутолитические изменения и неравномерное окрашивание, а чрезмерно продолжительное пребывание в формалине может маскировать антигенные детерминанты, что необходимо учитывать при иммуногистохимическом исследовании.
| Фиксатор | Механизм действия | Основное применение | Ограничения |
|---|---|---|---|
| 10% нейтральный забуференный формалин | Образование поперечных связей между белками | Рутинная гистология, парафиновые срезы, большинство окрасок | Может снижать иммунореактивность и повреждать нуклеиновые кислоты при длительной фиксации |
| 70% этиловый спирт | Коагуляция и дегидратация белков | Цитологические препараты, отдельные гистохимические методы | Вызывает сморщивание и уплотнение тканей |
| 96% этиловый спирт | Быстрая выраженная коагуляция белков | Фиксация мазков, сохранение некоторых растворимых компонентов | Резкая дегидратация и значительная деформация тканевой структуры |
| Жидкость Ценкера | Комбинированная фиксация солями ртути и бихроматами | Исторически применялась для кроветворной ткани и тонкой цитологической детализации | Токсичность, ртутный пигмент, сложная утилизация |
| Глутаральдегид | Интенсивное поперечное связывание белков | Преимущественно электронная микроскопия | Медленно проникает в ткань, менее удобен для рутинной световой микроскопии |
| Жидкость Буэна | Сочетание пикриновой кислоты, формальдегида и уксусной кислоты | Биопсии органов репродуктивной системы, эмбриональные ткани | Вызывает жёлтое окрашивание ткани и ограничивает молекулярные исследования |
Качество фиксации непосредственно определяет достоверность морфологической диагностики, поскольку артефакты могут имитировать дистрофию, некроз или клеточную атипию. Перед помещением материала в формалин крупные операционные препараты необходимо рассекать для равномерного проникновения раствора. Для большинства биопсий оптимальная продолжительность фиксации составляет примерно 6–24 часа, однако конкретный режим зависит от размеров и типа ткани. При планировании иммуногистохимических и молекулярно-генетических исследований время холодовой ишемии и длительность фиксации должны строго контролироваться.