2) Zill-Nilsen (+)
3) Mallory
4) Lee
Правильный метод — окраска по Цилю—Нильсену (Ziehl–Neelsen), применяемая для выявления кислотоустойчивых микобактерий, включая Mycobacterium tuberculosis. Кислотоустойчивость обусловлена высоким содержанием миколовых кислот и других липидов в клеточной стенке микобактерий. Благодаря этому после окрашивания основным фуксином бактерии сохраняют краситель даже при обработке кислотно-спиртовым раствором.
Классический протокол включает нанесение карболового фуксина с подогреванием, обесцвечивание кислотой или кислотным спиртом и докрашивание метиленовым синим. В результате микобактерии выглядят как тонкие красные или малиново-красные палочки на синем фоне ткани и клеточного детрита. Такой результат считается морфологическим признаком наличия кислотоустойчивых бактерий, однако сама окраска не всегда позволяет достоверно отличить M. tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий.
Окраска особенно важна при туберкулёзных поражениях с казеозным некрозом и гранулематозным воспалением, хотя при малом количестве возбудителей чувствительность метода ограничена. Отрицательный результат не исключает туберкулёз и требует сопоставления с морфологической картиной, клиническими данными, молекулярно-генетическим исследованием и культуральной диагностикой. Остальные перечисленные методы предназначены преимущественно для выявления других тканевых компонентов или микроорганизмов и не используют принцип кислотоустойчивости.
| Метод | Основной принцип | Морфологический результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Циль—Нильсен | Карболовый фуксин с подогреванием, кислотно-спиртовое обесцвечивание, контрастная окраска метиленовым синим | Красные кислотоустойчивые палочки на синем фоне | Выявление микобактерий, включая возбудителя туберкулёза, в тканях и патологическом материале |
| Киньон | Холодный вариант окраски с более концентрированным фуксином, без нагревания | Красные кислотоустойчивые бактерии | Альтернативное выявление микобактерий при сохранении того же диагностического принципа |
| Аурамино-родаминовая окраска | Связывание флуорохромов с липидными структурами клеточной стенки и исследование в люминесцентном микроскопе | Жёлто-зелёные светящиеся палочки на тёмном фоне | Более чувствительный скрининговый метод; положительные результаты обычно подтверждают другим методом |
| Окраска по Граму | Дифференциация бактерий по свойствам клеточной стенки | Микобактерии окрашиваются слабо, неравномерно или не визуализируются | Не является предпочтительной для диагностики туберкулёза из-за высокого содержания миколовых кислот |
| Левадити | Импрегнация тканей солями серебра | Тёмные извитые структуры, характерные для спирохет | Используется главным образом для выявления спирохет, а не кислотоустойчивых микобактерий |
| Маллори | Комбинированная окраска компонентов соединительной ткани, фибрина и межклеточного вещества | Контрастное окрашивание волокон и тканевых структур | Помогает оценивать морфологию ткани, но не выявляет микобактерии по их кислотоустойчивости |
При туберкулёзе в биоптате могут обнаруживаться эпителиоидно-клеточные гранулёмы, гигантские клетки Пирогова—Лангханса и казеозный некроз, но эти признаки не являются абсолютно специфичными. Обнаружение кислотоустойчивых палочек повышает вероятность микобактериальной инфекции, однако видовую принадлежность подтверждают методом ПЦР или культуральным исследованием. Для повышения выявляемости возбудителя важны правильный забор материала и исследование нескольких образцов. При люминесцентной микроскопии окраска аурамино-родамином может быть эффективнее, но классическим ответом для гистобактериоскопического выявления является метод Циля—Нильсена.