2) рентгенфлюоресценции
3) фотометрии
4) хромато-масс-спектрометрии (+)
Хромато-масс-спектрометрия является референсным методом подтверждающего и количественного исследования опиатов в биологических объектах. На первом этапе вещества разделяются в хроматографической системе, а затем идентифицируются по характерному масс-спектру и времени удерживания. Количественную концентрацию рассчитывают по калибровочной зависимости с использованием внутренних стандартов, что позволяет учитывать потери вещества при экстракции и особенности конкретной биологической матрицы.
В судебно-медицинской практике методом исследуют морфин, кодеин, 6-моноацетилморфин и другие соединения, а также их метаболиты. Для повышения аналитической точности образец подвергают экстракции; при необходимости проводят гидролиз конъюгированных форм, поскольку часть опиатов выводится в виде глюкуронидов. Газовая хромато-масс-спектрометрия может требовать дериватизации термолабильных или малолетучих соединений, тогда как жидкостная хромато-масс-спектрометрия позволяет анализировать многие вещества без этого этапа.
Цветные реакции и фотометрия обладают недостаточной специфичностью: они могут выявлять наличие определённых функциональных групп или суммарную окрашенную реакцию, но не позволяют надёжно различить близкие по строению опиаты и установить их концентрацию. Рентгенфлуоресцентный анализ предназначен преимущественно для элементного состава и не является стандартным способом определения органических опиоидных соединений в биологическом материале. Поэтому именно хромато-масс-спектрометрия обеспечивает сочетание специфичной идентификации и достоверного количественного результата.
| Метод | Основной аналитический принцип | Диагностическая ценность при исследовании опиатов |
|---|---|---|
| Хромато-масс-спектрометрия | Разделение компонентов по хроматографическим характеристикам и идентификация по масс-спектру | Высокая специфичность; позволяет подтвердить вещество и определить его концентрацию с применением калибровки и внутреннего стандарта |
| Жидкостная хромато-масс-спектрометрия | Хроматографическое разделение в жидкой фазе с последующей масс-спектрометрической детекцией | Высокочувствительное определение опиатов и метаболитов, включая термолабильные соединения; широко используется в современных лабораториях |
| Иммунохимический анализ | Специфическое связывание антитела с антигенными детерминантами вещества или его метаболитов | Подходит преимущественно для скрининга; возможны перекрёстные реакции, поэтому положительный результат требует инструментального подтверждения |
| Фотометрия | Измерение интенсивности поглощения или окраски исследуемого раствора | Ограниченная специфичность и влияние сопутствующих веществ; не является надёжным методом индивидуального количественного определения опиатов |
| Цветные химические реакции | Образование окрашенного продукта при взаимодействии реагента с определёнными химическими группами | Ориентировочное или качественное выявление; не обеспечивает достоверной идентификации конкретного опиата и его концентрации |
| Рентгенфлуоресцентный анализ | Регистрация характеристического рентгеновского излучения химических элементов | Информативен для элементного анализа, но неприменим как стандартный метод количественного определения органических опиоидов в биоматериале |
Интерпретация результата должна учитывать вид биологического материала, время после употребления, посмертные изменения и предел количественного определения метода. Важное значение имеет раздельное определение исходного вещества и метаболитов, например 6-моноацетилморфина как маркера употребления героина. Обнаружение опиата само по себе не доказывает токсическое или летальное действие; вывод формируют с учётом концентрации, клинических и секционных данных.