2) независимо от результатов отрицательных контролей на каждой стадии процесса (+)
3) в случае загрязнения положительного контроля в полимеразной цепной реакции
4) в случае загрязнения отрицательного контроля при постановке электрофореза
Малонасыщенные биологические следы содержат небольшое количество матричной ДНК, поэтому при их исследовании особенно выражены стохастические эффекты амплификации: выпадение аллелей, дисбаланс гетерозигот, появление единичных неспецифических пиков и преимущественное усиление случайно присутствующей посторонней ДНК. Даже минимальный перенос клеточного материала от сотрудника лаборатории способен сформировать частичный либо полный генотип, ошибочно интерпретируемый как компонент исследуемого следа.
Сравнение полученных профилей с генотипами экспертов и другого персонала проводят независимо от результатов отрицательных контролей. Отрицательный контроль подтверждает отсутствие выявляемого загрязнения только в конкретной контрольной пробе, но не исключает локальную контаминацию отдельного объекта, расходного материала или рабочего участка. Использование базы исключающих генотипов персонала позволяет своевременно распознать лабораторное загрязнение, исключить ложное включение постороннего лица в смешанный профиль и повысить доказательственную надежность молекулярно-генетического заключения.
| Элемент контроля | Назначение | Ограничение | Значение для малонасыщенного следа |
|---|---|---|---|
| Отрицательный контроль выделения ДНК | Выявление загрязнения реактивов и этапа экстракции | Не отражает контаминацию конкретного исследуемого объекта | Нормальный результат не исключает случайного переноса ДНК персонала |
| Отрицательный контроль ПЦР | Контроль чистоты амплификационной смеси | Не выявляет загрязнение, возникшее до приготовления смеси | Не заменяет проверку профиля по базе исключения |
| Контроль электрофореза | Оценка корректности разделения и регистрации фрагментов | Не позволяет установить источник ранее внесенной ДНК | Исключает преимущественно технические ошибки стадии детекции |
| Положительный контроль | Подтверждение работоспособности реагентов и оборудования | Не предназначен для исключения загрязнения исследуемого образца | Его соответствие ожидаемому профилю не подтверждает чистоту следа |
| Повторное исследование | Проверка воспроизводимости аллелей | Контаминант может воспроизводиться при устойчивом источнике загрязнения | Помогает отличать истинные аллели от стохастических пиков |
| Сравнение с генотипами персонала | Установление лабораторного источника посторонней ДНК | Требует актуальной базы исключающих профилей | Обязательно для надежной верификации частичных и смешанных генотипов |
Профиль, совпадающий с генотипом сотрудника, рассматривают как вероятную лабораторную контаминацию с учетом числа совпавших локусов, высоты пиков и обстоятельств обработки объекта. Такое совпадение должно быть документировано, а результаты соответствующего этапа — критически пересмотрены. При необходимости выполняют повторное выделение ДНК из резервной части следа и повторную амплификацию. Комплексный контроль снижает риск экспертной ошибки и обеспечивает прослеживаемость всего лабораторного процесса.