2) настаивание с водой, подкисленной серной кислотой (рН 2-3)
3) твердофазную экстракцию на колонках с полиэтиленгликолем
4) твердофазную экстракцию на колонках с силикагелем, модифицированным С18 (+)
Амитриптилин — липофильное соединение из группы трициклических антидепрессантов, являющееся слабым основанием с pKa около 9,4–9,7. В кислой среде он преимущественно находится в протонированной, водорастворимой форме, тогда как при подщелачивании возрастает доля неионизированной формы, хорошо удерживаемой неполярным сорбентом. Поэтому для анализа небольших объёмов сыворотки или мочи оптимальна твердофазная экстракция на силикагеле, модифицированном октадецильными группами C18: после подготовки образца амитриптилин сорбируется за счёт гидрофобных взаимодействий, а затем элюируется органическим растворителем.
Твердофазная экстракция обеспечивает эффективное концентрирование вещества, удаление белков и других компонентов биологической матрицы, низкий расход растворителей и хорошую воспроизводимость при объёме образца 1–2 мл. Экстракция хлороформом при pH 2–3 методически нерациональна, поскольку протонированный амитриптилин преимущественно остаётся в водной фазе; для жидкость-жидкостной экстракции оснований, напротив, обычно создают щелочную среду. Настаивание с подкисленной водой не обеспечивает селективного выделения и концентрирования аналита, а полиэтиленгликоль не относится к стандартным высокоселективным сорбентам для такой пробоподготовки.
| Критерий | Особенности метода | Значение для определения амитриптилина |
|---|---|---|
| Химические свойства аналита | Липофильное слабое основание; pKa приблизительно 9,4–9,7 | Форма вещества зависит от pH и определяет его растворимость и сорбцию |
| Сорбент C18 | Неполярный обращённо-фазовый силикагель с октадецильными группами | Удерживает преимущественно неионизированную липофильную форму амитриптилина |
| Подготовка образца | Обычно подщелачивание до pH около 9–10 с последующим нанесением на кондиционированную колонку | Повышает долю нейтрального аналита и эффективность его извлечения из сыворотки или мочи |
| Элюирование | Использование метанола, ацетонитрила или другого подходящего органического элюента | Позволяет получить концентрированный экстракт для хроматографического или масс-спектрометрического анализа |
| Хлороформ при pH 2–3 | Кислая среда стабилизирует катионную, водорастворимую форму основания | Переход амитриптилина в органическую фазу недостаточен, поэтому способ непригоден в указанном варианте |
| Настаивание с подкисленной водой | Происходит преимущественно перевод основания в водорастворимую соль | Отсутствуют селективное отделение от матрицы и необходимое концентрирование |
| Полиэтиленгликолевый сорбент | Не является типичной валидированной обращённо-фазовой системой для извлечения трициклических аминов | Ожидаются менее предсказуемые удерживание, очистка и выход аналита по сравнению с C18 |
Выбор C18 особенно важен при ограниченном объёме биологического материала, поскольку сочетает очистку образца с концентрированием амитриптилина. После экстракции количественное содержание обычно устанавливают методом газовой или жидкостной хроматографии, часто с масс-спектрометрическим детектированием. При судебно-химической оценке необходимо учитывать не только амитриптилин, но и его метаболит нортриптилин, а также концентрацию вещества, матрицу и интервал времени после приёма. Сам факт обнаружения препарата без количественной и клинико-морфологической интерпретации не позволяет автоматически судить о причине смерти или степени интоксикации.