2) определения площади соответствующего пика как процентной части общей площади всех пиков, за исключением пиков, соответствующих растворителям или реактивам, подвижной фазе или матрице образца
3) =»сравнения сигнала (площади или высоты пика), соответствующего определяемому веществу, на хроматограмме испытуемого раствора, и сигнала (площади или высоты пика) определяемого вещества на хроматограмме испытуемого раствора с известной добавкой определяемого вещества»
4) =»сравнения отношения сигналов (площадей или высот пиков), соответствующих определяемому веществу и внутреннему стандарту, на хроматограмме испытуемого раствора и отношения сигналов (площадей или высот пиков), соответствующих определяемому веществу и внутреннему стандарту, на хроматограмме раствора стандартного образца»
При методе внешнего стандарта содержание вещества устанавливают по отклику детектора на анализируемое соединение в испытуемом растворе и в отдельном растворе стандартного образца с известной концентрацией. Сравнивают площадь или высоту идентифицированного пика при одинаковых условиях хроматографирования; идентичность пика подтверждается, в частности, совпадением времени удерживания. При линейной зависимости отклика от концентрации концентрацию рассчитывают пропорционально отношению сигналов, например: Cx = Cст × Ax/Aст, с учётом разведений и коэффициентов пересчёта.
Таким образом, верным является вариант 1: он отражает основной принцип количественной газовой хроматографии с использованием внешнего стандарта. На практике предпочтительно применять градуировочную зависимость, построенную по нескольким стандартным растворам, поскольку она позволяет оценить линейность, диапазон измерений и правильность расчёта. Метод требует стабильности объёма ввода, условий разделения и чувствительности детектора, так как внешний стандарт не компенсирует потери вещества и вариабельность инжекции внутри конкретной пробы.
Другие подходы основаны на иных принципах количественной оценки. Процентное содержание по общей площади пиков соответствует методу нормализации площадей; добавление известного количества аналита в пробу является методом стандартных добавок; отношение сигнала аналита к сигналу специально введённого вещества характеризует метод внутреннего стандарта.
| Метод | Сравниваемый показатель | Основной принцип | Особенности применения |
|---|---|---|---|
| Внешний стандарт | Площадь или высота пика аналита в пробе и стандарте | Концентрацию определяют по прямому сопоставлению откликов или градуировочной кривой | Не компенсирует различия объёма ввода и матричные эффекты; необходим строгий контроль условий анализа |
| Внутренний стандарт | Отношение сигнала аналита к сигналу добавленного внутреннего стандарта | Изменения условий ввода и регистрации частично компенсируются одинаковым влиянием на оба соединения | Внутренний стандарт не должен присутствовать в образце и должен быть разделён с аналитом |
| Стандартные добавки | Изменение сигнала после внесения известного количества аналита | Концентрацию находят экстраполяцией зависимости сигнала от величины добавки | Особенно полезен при выраженном влиянии матрицы образца |
| Нормализация площадей | Площадь пика как доля суммы площадей пиков | Состав выражают в процентах от общей хроматографируемой фракции | Требует сопоставимых коэффициентов отклика и регистрации всех значимых компонентов; абсолютная концентрация обычно не определяется |
| Многоточечная калибровка | Сигналы серии стандартов с известными концентрациями | Строят зависимость отклик детектора — концентрация и по ней рассчитывают содержание в пробе | Позволяет проверить линейность, рабочий диапазон и выявить отклонения от пропорциональности |
| Пик аналита | Площадь или высота при установленном времени удерживания | Сигнал должен быть специфичным для определяемого соединения и отделён от соседних пиков | Площадь обычно предпочтительнее при небольших колебаниях формы пика, поскольку лучше отражает суммарный отклик |
Выбор внешнего стандарта оправдан при воспроизводимой пробоподготовке и стабильной работе газового хроматографа. Достоверность результата оценивают по специфичности, линейности, прецизионности, правильности и пределам обнаружения и количественного определения. При сложной матрице или нестабильном вводе более надёжными могут быть внутренний стандарт либо метод стандартных добавок. Независимо от варианта количественной оценки, расчёт должен учитывать все разведения и валидированные коэффициенты пересчёта.